实验指南

当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面由于细胞密度过大，细胞与细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止将一方面也会因营养物枯竭和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。因此需要将培养细胞进行分离扩大培养，细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的这个过程称为传代或者再培养。

动物细胞培养中常用的液体有平衡盐溶液、消化液、pH调整液、抗菌素液、谷氨酰胺、肝素钠、蛋白酶抑制剂、培养基等。这些液体在配制时有如下要求：使用高纯化的三蒸水；保证各组分完全溶解；pH值测定和调整；消毒灭菌分装小瓶，抽样做无菌实验；配制细胞用液器材的清洁要求同细胞培养器材。那么细胞培养用液的分装方法与要求有哪些呢？

动物细胞培养技术已经当今生命科学各领域的基础技术和基本技能，它也是细胞工程、基因工程和生物医学工程的重要研究手段。那我们在实际的动物细胞培养实验中需要注意哪些基本要求呢？

组织分离之后，原代细胞培养即可分为两种：一种将组织块贴附于适宜的基质中，细胞可自组织块向外迁移生长；另一种是将组织块用机械法或酶消化法处理后获得细胞悬液，接种细胞悬液，其中部分细胞最终将黏附于基质开始生长。

原代细胞培养，是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，在体外培养，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经胰酶消化，分散成为单个游离的细胞，在人工条件下培养，使其不断地生长及繁殖。今天为大家详细介绍小鼠胚胎细胞原代培养的操作步骤和注意事项。

原代培养是建立各种细胞系（株）必经的阶段，其是否成功与组织污染与否、供体年龄、培养技术和方法、适宜培养基的选择等多种因素有关。下面就为大家详细介绍一下鸡胚原代细胞的培养操作步骤以及注意事项。

细胞在体外培养过程需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态以及细胞有无移动、污染、培养基pH值是否变酸、培养基变黄是否需要更换等。细胞常规检查观察的方法有以下4种。

体外培养的原代细胞或细胞株要在休外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，维持细朐种的延续。放平细胞瓶，当发现悬浮细胞长到瓶壁85%～90%时，从容器中取出细胞，以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为悬浮细胞的传代培养。