细胞周期检测试剂盒

细胞周期是指细胞自一次分裂完成至下一次分裂终了的全过程,其可分为间期与分裂期两大阶段。在正常的细胞周期中,分裂间期持续的时间远远大于分裂期,几乎占到细胞整个周期的90%左右。所以细胞周期分析中,主要是研究细胞的分裂间期的细胞生命活动,而细胞在周期活动中,不同时期,其DNA的含量有所不同。利用这一特性,DNA含量成为了一项关键的分析指标,尤其是在一些癌变细胞,或者药物干预后的细胞出现异常生物活动的时候,被广泛应用于肿瘤,免疫等科学研究中。

细胞分裂间期包括:

  • G0/G1期DNA合成前期,为DNA合成做好物质准备,DNA含量为2N。
  • S期DNA的合成期,此时期完成DNA的合成、合成与DNA组装构成染色质等相关组蛋白,DNA的含量增加,在2N-4N范围间。
  • G2/M期DNA合成后期, DNA复制结束,开始分裂准备,DNA含量为4N。

根据细胞不同周期时的DNA含量的不同,去检测DNA含量,选择一些能与DNA结合的荧光染料(如PI,DAPI等),让其紧密嵌入双链DNA结构中,结合后可以产生荧光信号,其荧光信号的强度和双链DNA的含量成正比。染色后,利用流式细胞仪这一精密仪器,可以对细胞的DNA含量进行定量测定,进而根据DNA分布模式的差异,深入分析细胞周期的不同阶段及凋亡状态。

武汉尚恩生物周期检测试剂盒设计灵活,适用于贴壁培养及悬浮状态下的细胞周期检测。若需对组织样本进行细胞周期分析,则需先通过消化处理将组织解离成单细胞悬液,以便后续的检测流程能够顺利进行。

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细胞周期检测试剂盒特点

  • 适用于多种贴壁、悬浮细胞样本
  • 区分不同时期细胞占比
  • 方法简单,操作简便
  • 无需额外使用其他昂贵试剂
上图为 70%乙醇固定过夜后的 Jurkat 细胞周期(SNK-015)试剂盒流式检测结果

PI 染色后,假设 G0/G1 期细胞的荧光强度为 1,那么含有双份基因组 DNA 的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为 2,正在进行 DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1~2 之间。如果样品中有凋亡细胞存在,由于细胞核发生浓缩以及 DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组 DNA 片段在染色过程中丢失,因此凋亡细胞在染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于 1,在流式检测的结果图上出现所谓的 sub-G1 峰,即凋亡细胞峰。成为识别凋亡细胞的重要标志。

FAQs

  • 胰酶会影响检测吗?

    不会,胰酶消化细胞并收集,会对细胞进行PBS清洗,胰酶残留量少,不会影响检测结果。

  • 需要固定细胞吗?

    必须要固定细胞,没有固定的细胞,由于细胞膜的存在,PI无法进入细胞内,与DNA完全充分结合,会导致最终实验数据异常。

  • 如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?

    固定的细胞最好是按照说明书步骤进行染色上机检测,如果是细胞固定后无法及时上机检测,可以固定后放-20度过夜,上机前半小时进行染色检测。

  • 可以直接用75%乙醇重悬固定细胞吗?

    不可以,如果是直接加入70~75%乙醇,会导致细胞聚团,很难重成单细胞,影响固定效果,也可能导致固定后无细胞沉淀。正确的操作是:用PBS重悬细胞,充分分散成单细胞后,缓慢地滴入无水乙醇中,使其终浓度为70~75%乙醇。

  • 悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?

    都可以检测,如果是贴壁细胞,需要对细胞进行消化收集,得到细胞悬液,才能进行后续流式细胞仪上机检测。

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