细胞活力/毒性检测试剂盒

MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,中文名噻唑蓝。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源底物MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。再利用二甲基亚砜(DMSO)等溶解剂溶解细胞中的甲臜沉积物,用酶标仪于490 nm或570 nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,甲臜形成的量与活细胞数成正比。MTT应用包括药物敏感性、细胞毒性、对生长因子的反应和细胞活化。MTT检测法具有高度的敏感性、可重复性,并适用于高通量筛选。

CCK8作为MTT方法的优化升级,WST-8在电子耦合试剂的辅助下,能在线粒体内琥珀酸脱氢酶的作用下,迅速转化为高水溶性的橙黄色甲臜产物(formazan),其颜色的深浅直观反映了细胞的增殖活力与毒性水平——增殖越强,颜色越深;毒性越大,颜色则越浅。通过酶标仪在450nm波长下的精确测量OD值,即可间接量化活细胞数量,实现高效、灵敏的检测。

MTT与CCK8是细胞增殖与毒性检测实验中代表性的高灵敏度检测试剂盒,应用范围极为广泛,包括但不限于药物筛选过程中的细胞反应评估、细胞增殖速率的精确测定、细胞毒性测试、肿瘤细胞的药敏性分析及生物活性因子的效能检测等,是科研工作者不可或缺的得力工具。CCK8法因其操作简便、灵敏度高、对细胞低毒性等优点,在更多领域得到了广泛应用。

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细胞活力/毒性检测试剂盒应用

细胞活力/毒性检测试剂盒(MTT/CCK8)用于以96孔板的形式对细胞的增殖和活力进行非放射性的光谱检测:

  • 测量生长因子、激素、促分裂因子及各种营养物质对细胞增殖的影响
  • 细胞毒性和细胞抑制化合物分析,如抗癌药物和其他药物化合物的分析
  • 生长抑制性抗体和生理性调节因子的评估
  • 评估细胞的增殖能力,用于绘制细胞生长曲线、监测细胞增殖速度

细胞活力/毒性检测试剂盒优势比较

检测方法 MTT法 WST-1法 CCK-8法
甲臜产物的水溶性 差(需加有机溶剂溶解后再检测)
产品性状 粉末 溶液 溶液
使用方法 配成溶液后使用 即开即用 即开即用
检测灵敏度 很高
检测时间 较长 较短 最短
检测波长 560-600 420-480 430-490
细胞毒性 高,细胞形态完全消失 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变
试剂稳定性 一般 一般 很好
批量样品检测 可以 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 非常便捷

CCK8额外优势:

  • 酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰;
  • 细胞毒性非常低,因此加入试剂显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间;同时也可以去除含CCK8的培养基,添加新鲜培养基以使用细胞进行其他实验,MTT无法实现这种操作;
  • MTT由于需要吸走培养基并更换DMSO溶解液,因此不适用于悬浮细胞检测,CCK8由于无需换液完美适用悬浮细胞;

细胞活力/毒性检测试剂盒产品示例

以CCK8法为例:

实验一、测试试剂线性

接种已知数量的细胞,使用CCK8试剂孵育2h后采用酶标仪检测OD450,确定产品显色值与细胞数量线性关系,验证试剂盒工作是否正常。结果显示显色值(已减去空白孔本底OD值)与细胞数量呈良好线性关系,试剂盒可以有效工作。

实验二、细胞因子刺激实验

接种固定数量细胞,再添加不同浓度的细胞因子,检测细胞因子对细胞刺激效果。检测结果显示,试剂盒检出GM-CSF对TF-1细胞ED50约100-500pg/mL,添加1-2ng/mL GM-CSF可以达到最大使用效果。

实验三、细胞增殖实验

在一块96孔板上接种相同数量细胞,每日选择3-5孔加入CCK8孵育2h后检测OD450,多日数据整合并绘制生长曲线。

细胞活力/毒性检测试剂盒产品列表

货号 产品名称 规格
SNK-005 MTT细胞活力、毒性检测试剂盒 500次
SNK-006 CCK8细胞活力、毒性检测试剂盒[暂不提供] 100次 | 500次
SNK-010 增强型CCK8细胞活力、毒性检测试剂盒 100次 | 500次

FAQs

  • CCK8细胞毒性如何?

    CCK8细胞毒性很低,对细胞增殖基本没有影响,甚至可以实现加入CCK8检测后换液继续培养细胞的操作。

  • 细胞增殖/毒性检测过程中酚红会对CCK8数值产生影响吗?

    CCK8显色OD450nm,实际检测过程中酚红也会有较低的读值,但可以通过空白孔去除本底读数从而实现酚红不影响实验结果。

  • 培养基中哪些物质会影响MTT和CCK8的检测?

    MTT和CCK8实验原理都是基于琥珀酸脱氢酶还原反应,因此培养基中存在的氧化还原性物质会对实验产生影响,常见的物质有还原型谷胱甘肽、巯基乙醇、维生素C、半胱氨酸、地塞米松、转铁蛋白等,因此培养基中含过量以上物质建议换液使用不含或者更低含量的培养基进行实验。

  • CCK8细胞溶液可以在4度保存多久?

    CCK8溶液比较稳定,可以在4度保存一年以上,也可以在-20度保存两年以上(注意避免反复冻融)。

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