MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,中文名噻唑蓝。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源底物MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。再利用二甲基亚砜(DMSO)等溶解剂溶解细胞中的甲臜沉积物,用酶标仪于490 nm或570 nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,甲臜形成的量与活细胞数成正比。MTT应用包括药物敏感性、细胞毒性、对生长因子的反应和细胞活化。MTT检测法具有高度的敏感性、可重复性,并适用于高通量筛选。
CCK8作为MTT方法的优化升级,WST-8在电子耦合试剂的辅助下,能在线粒体内琥珀酸脱氢酶的作用下,迅速转化为高水溶性的橙黄色甲臜产物(formazan),其颜色的深浅直观反映了细胞的增殖活力与毒性水平——增殖越强,颜色越深;毒性越大,颜色则越浅。通过酶标仪在450nm波长下的精确测量OD值,即可间接量化活细胞数量,实现高效、灵敏的检测。
MTT与CCK8是细胞增殖与毒性检测实验中代表性的高灵敏度检测试剂盒,应用范围极为广泛,包括但不限于药物筛选过程中的细胞反应评估、细胞增殖速率的精确测定、细胞毒性测试、肿瘤细胞的药敏性分析及生物活性因子的效能检测等,是科研工作者不可或缺的得力工具。CCK8法因其操作简便、灵敏度高、对细胞低毒性等优点,在更多领域得到了广泛应用。