MTT细胞活力、毒性检测试剂盒

¥125.00

MTT 全称为 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide,中文名噻唑蓝。尚恩生物MTT细胞活力/毒性检测试剂盒,检测方法灵敏度高、经济实用,已广泛用于细胞因子活性检测、细胞毒性检测等诸多实验过程。

500次
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SKU: SNK-005 分类: 标签:
产品名称 MTT细胞活力、毒性检测试剂盒
货号 SNK-005
规格 500 次
简介 MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,中文名噻唑蓝。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源底物MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。再利用二甲基亚砜(DMSO)等溶解剂溶解细胞中的甲臜沉积物,用酶标仪于490 nm或570 nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,甲臜形成的量与活细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,活细胞数越多,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
该检测方法灵敏度高、经济实用,已广泛用于细胞因子活性检测、细胞毒性检测等诸多实验过程。
使用方法 1.提前将细胞按实验需要接种到96孔培养板里(细胞增殖活力实验建议2000个/孔/100μL,细胞毒性实验建议5000个/孔/100μL,具体接种数量可以视实验需要及细胞增殖速度调整),待细胞贴壁后,按照实验设计进行加药、细胞因子刺激、转染等细胞处理;
2.细胞处理完成后,每孔加入10μL MTT工作液,在细胞培养箱内孵育4 h;如果担心药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和MTT工作液,但没有细胞的孔作为空白对照;
3.完成孵育后孔板底部会出现少量紫色结晶,用移液枪小心吸除孔板内上清溶液,注意避免吸到紫色结晶以免影响后续检测;
4.向孔板中加入100μL溶解液,37℃孵育15 min左右,期间可用手指轻微敲击板底小幅度震荡,待紫色结晶全部溶解(紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些;如果紫色结晶较大较多,可适当延长溶解时间);
5.在波长570nm或560-600 nm处测定OD值,根据OD值判断活细胞数量以确定处理过程对细胞活性的影响;
6.结果计算:
产品组分
存储条件 2-8℃或-20℃,避光保存
保质期 2-8℃(3个月)或-20℃(一年)(避光,避免反复冻融)

注意事项:
1.溶剂在温度较低时可能结晶,使用前注意复温融化。
2.MTT工作液呈淡黄色溶液,若发现颜色变黑或者灰绿色请勿使用。
3.试剂盒反复冻融会降低检测效果,虽然该试剂在反复冻融3次后对检测效果无明显影响,但可在第一次解冻后分装成小规格。反复冻融过程中可能出现少量沉淀,应将其平衡至室温,并尽可能溶解。
4.多数情况下,在细胞中加入MTT工作液孵育4小时可获得理想结果,但孵育时间因细胞类型、细胞密度等实验条件的不同而不同。
5.信号强度和稳定性会受到温度的影响,反应前将MTT工作液平衡至室温。
6.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
7.本产品基于琥珀酸脱氢酶还原反应,样品中应尽量不含较多还原剂及抗氧化剂(还原型谷胱甘肽、巯基乙醇、维生素C等)。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。
8.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
9.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。