实验指南

根据植物细胞全能性学说，植物的器官、组织、细胞甚至是去除了细胞壁的原生质体都可以进行离体培养，称为广义的植物组织培养。植物组织培养技术可应用于优良品种的快速繁殖、病毒的脱除、单倍体育种、种质资源的保存及遗传转化等方面，其中离体快繁和脱毒应用最多，效果也最明显。

动物单细胞的制备动物单细胞制备的方法有酶法、机械法和螯合剂解离法。目前最常用的方法是酶法，即将动物胚胎或幼龄动物的器官、组织取出后，放在含抗生素的平衡盐溶液中，在无菌条件下，用胰蛋白酶或胶原酶解离主要成分为胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白和弹性蛋白的细胞间基质，使组织分散，获得单个细胞。

虽然各种培养基的组成各有不同，但商品化的干粉型培养基的配制方法大同小异。以往实验室自购各个组分，称量后再按一定顺序进行溶解配制的老方法，一方面需购置大量各种各样的成分，而且每种成分用量很少，很难控制和统一；另一方面要精确称量，顺序溶解，步骤繁琐，质量难以保证。因此，自行配制培养基的方法除了因需要而专门配制一些特殊培养基外，大部分已不再使用。

合成培养基是对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下的模拟。这种模拟不是被动的、不加选择的。而是在体外反复实验和筛选，进行强化和重新组合后形成的人工合成培养基。合成培养基种类很多，据报道已有数十种，每种合成培养基最初都是为培养某种细胞而设计的，但应用后发现其他细胞也可以生长或经改良也适合其他细胞的生长。

移液器（加样器），俗称移液枪，用干吸取移动液体或滴加样品，移液枪可根据需要调节量的大小，吸量准确、方便。特别是微量移液枪，可保证实验样品或试剂取量精确，重复性好。当前，有可高温消毒、多通道的各类移液枪供使用者选择，能确保移液准确、快速、方便且达到无菌要求。

无论是原代培养还是细胞系的传代培养，一旦培养开始，就要定期更换培养基或“饲养”，如果细胞增殖。随后迟早要进行传代培养。对干不增殖的培养物，也需要定期更换培养基，因为细胞仍会代谢，培养基的某些成分会耗尽或自然降解细胞传代间隔在不同细胞系中因生长速率和新陈代谢的不同而不同。

消化液常在贴附型细胞原代培养或传代培养过程中用来分散组织或细胞团，以达到离散细胞，获得细胞悬液的目的。目前常用的消化液主要有胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液以及乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)液。

动物细胞分离培养室用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，人们借以观察细胞的生长、增殖和细胞分化以及细胞凋亡或死亡的过程。因为分离的细胞没有免疫防御系统，所以动物细胞分离操作需要比外科手术更加严格的无菌操作，无菌操作的原则就是保证细胞分离过程中的操作环境，使用的器械、耗材以及试剂无菌。