细胞聚团了怎么办？ - 武汉尚恩生物技术有限公司

在细胞培养过程中，一个常见且令人头疼的问题就是细胞聚团。当细胞不按预期那样分散生长，而是紧紧聚成一团。非正常聚团会影响我们对细胞状态的判断，影响细胞的正常增殖，甚至影响实验进程。那么，遇到这种情况我们应该如何应对呢？本文中小尚为大家总结了细胞聚团的主要原因，和有效的解决方法，快收藏起来吧~

1以聚团为特性的细胞

细胞聚团现象得分情况来看。首先，一些种类的细胞天生就是聚团生长，比如NK-92MI细胞，是一种聚团悬浮生长的细胞系，当细胞分散无法聚团反而说明细胞状态不好。对于这些细胞正常培养就行，不需要特殊处理。

▲NK-92MI细胞聚团悬浮生长

2有聚团倾向的单层贴壁细胞

一些单层贴壁生长的细胞系有着较强的聚团倾向，这类细胞通常贴壁较弱，且在遇到低温环境、剧烈震荡、血清不合适、密度过大的时候容易发生聚团，如LNCap前列腺癌细胞及其衍生细胞系（Vcap、C4-2、C4-2B等）、某些神经母细胞瘤细胞系（SH-SY5Y、SK-N-BE（2）等），某些胶质瘤细胞系（U87MG、GL261等）。

建议使用高贴附性培养器皿培养这些细胞，可以预防聚团。

如果发生聚团，可以将细胞重新消化接种，并适当延长消化时间，通常能够使细胞恢复正常单层贴壁。

▲左：U87MG细胞高密度下形成大量细胞团

▲右：重新消化接种后细胞不再聚团

但如果重新消化没有解决问题，建议使用多聚赖氨酸包被培养器皿，进一步加强培养器皿的贴附性。多聚赖氨酸是一种带正电荷的合成化合物，通过电荷作用，可有效地促进细胞粘附，减少聚团的几率。

▲左：GL261细胞聚团漂浮

▲右：消化接种至多聚赖氨酸包被的器皿，细胞恢复正常贴壁

这类细胞对血清比较挑剔，不同品牌的血清对其贴壁性影响较大，建议用优质进口血清确保达到更好的贴壁效果，减少聚团发生。

3消化时间不足导致聚团

消化时间不足导致细胞没有消化开，细胞会抱团贴壁。接种后等待24-48小时，待细胞状态稳定后，重新进行消化接种即可，注意延长消化时间，并在接种后于显微镜下确认细胞已经分散成单细胞。

▲左：C4-2细胞因消化时间不足而聚团

▲右：重新消化接种后细胞均匀单层铺展

4细胞过度生长导致自发聚团

有些贴壁细胞长满后不传代，长时间高密度培养，可能会出现自发聚团，形成非常致密的细胞团，这种细胞团不容易清除。如果出现这种情况，可以尝试将细胞团消化开。如果消化不开，可在细胞消化下来后转移至离心管静置自然沉降5min左右，团块更快沉降至底部，吸取上方悬液，转移至新的培养瓶。所以咱们在培养细胞的时候要密切关注细胞密度，除非实验要求细胞铺满，一般到80%左右汇合度传代最好。

5震荡或温度下降导致聚团或漂浮

贴壁性较弱的细胞（如HEK293系列细胞系）在遇到快递运输震荡、低温、室温静置太长时间、添加的培养基或其他试剂过冷、密度过大等情况时会成团漂浮。

▲左：HEK293细胞受到震荡后聚团漂浮

▲右：HEK293细胞正常贴壁

当贴壁细胞发生聚团漂浮，需要将所有上清转移至离心管，离心收集细胞，并按照下图所示的步骤在离心管里消化后重新接种。

▲贴壁细胞聚团漂浮处理流程示意图

平时在培养贴壁弱的细胞时注意传代、换液前将培养基、PBS等试剂充分预热，不要把细胞放在室温下太长时间，操作时轻拿轻放。

6悬浮细胞聚团问题

除了天生聚团生长的悬浮细胞，单个分散生长的悬浮细胞偶尔也会出现一些十几个细胞聚集成的小团，这是正常现象，不必把团块吹开（除非实验需要）。

▲正常THP-1细胞，有一些小细胞团，是正常现象

如果出现大量的细胞团，几乎没有分散细胞，这可能是细胞遭受刺激、不适应环境或者受到损伤的表现。需检查培养基配方是否正确，使用的血清是否合适，是否存在过度吹打、离心等情况导致细胞受到了损伤。若细胞出现此类聚团，确保使用正确的培养基，优质进口血清，耐心静置培养1~2周，每2~3天进行补液或半量换液，尽量不离心，细胞状态恢复后可自然分散开。