细胞培养过程中，支原体污染是世界性的难题。支原体本身只有0.1-0.3um，无法在常规培养时用显微镜观察到，因此可能出现细胞污染支原体但却无法获知的情况。同时，支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误，严重的支原体污染甚至会产生影响细胞状态、生长速度等表观现象，因此支原体污染的检测对于细胞培养是相当必要的。

尚恩生物推出支原体检测服务，采用多种检测方法对细胞进行支原体检测，可以根据自身实验需要选择合适的方法，也可以结合多种检测方法提高检出率，让您更清楚的了解所使用的细胞是否存在支原体污染，为您的实验助力。

巢式PCR检测法

采用两对巢式引物对样品进行PCR检测，具体原理可以参考尚恩支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）（货号SNCD-001），使用巢式引物进行PCR可以有效提高检测灵敏度和特异性。

非巢式PCR检测法

非巢式PCR检测法即采用常规PCR法，使用一对针对支原体16S的特异性引物对样本进行PCR检测，通过琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物确定是否污染支原体。

显色法（LAMP法）

LAMP法是基于PCR法的改进方法，也称一步恒温法，其引物设计是关键，经过设计的引物可以保证在恒定温度下可以不断进行PCR反应，具体原理可以参考尚恩支原体支原体LAMP检测试剂盒（一步法）（货号SNCD-004）。该方法不需要PCR仪、不需要跑胶也不需要额外染色，只需要恒温水浴后观察颜色变化即可，对设备和操作要求较低。

荧光染色法（DAPI/Hochest 33258）

荧光染色法是基于核酸染料（DAPI或Hochest 33258）的支原体检测方法，其原理是支原体附着于细胞表面生长，通过核酸染料染色后，细胞核内核酸被染色，同时若细胞表面存在支原体，支原体核酸也将被染色形成核外染色的情况，通过核外是否有荧光判断是否存在支原体污染。污染严重的细胞直接可以染色观察，污染较轻的细胞可以通过配合指示细胞（如VERO细胞）共培养的方式检测以提高检测灵敏度。该方法是《中国药典》2020年版 四部 3301支原体检查的中所述的支原体检测方法。

DAPI与Hochest 33258区别在于前者不能通过活细胞膜染色到细胞核，只能先处理细胞后再染色，后者可以通过或细胞膜染色到细胞核，可以直接染色活细胞，实际实验过程中客户可以指定染料类型，若未指定由我方按实际情况随机选择。

培养法

培养法是使用支原体培养基对样本进行直接培养，通过观察培养基是否可以增殖出支原体判断是否存在支原体污染。该方法仅适合检测活体支原体，对于死亡的支原体无法检出，同时由于支原体单独培养时增殖相对缓慢，因此检测时长通常在4周以上。该方法是《中国药典》2020年版 四部 3301支原体检查的中所述的支原体检测方法。