实验指南

无论是原代培养还是细胞系的传代培养，一旦培养开始，就要定期更换培养基或“饲养”，如果细胞增殖。随后迟早要进行传代培养。对干不增殖的培养物，也需要定期更换培养基，因为细胞仍会代谢，培养基的某些成分会耗尽或自然降解细胞传代间隔在不同细胞系中因生长速率和新陈代谢的不同而不同。

消化液常在贴附型细胞原代培养或传代培养过程中用来分散组织或细胞团，以达到离散细胞，获得细胞悬液的目的。目前常用的消化液主要有胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液以及乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)液。

动物细胞分离培养室用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，人们借以观察细胞的生长、增殖和细胞分化以及细胞凋亡或死亡的过程。因为分离的细胞没有免疫防御系统，所以动物细胞分离操作需要比外科手术更加严格的无菌操作，无菌操作的原则就是保证细胞分离过程中的操作环境，使用的器械、耗材以及试剂无菌。

细胞的纯化一般分为自然纯化和人工纯化两大类。可根据不同细胞种类、来源、实验要求和目的而选择不同的纯化方法。下面主要介绍一些基本的方法。

当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面由于细胞密度过大，细胞与细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止将一方面也会因营养物枯竭和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。因此需要将培养细胞进行分离扩大培养，细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的这个过程称为传代或者再培养。

动物细胞培养中常用的液体有平衡盐溶液、消化液、pH调整液、抗菌素液、谷氨酰胺、肝素钠、蛋白酶抑制剂、培养基等。这些液体在配制时有如下要求：使用高纯化的三蒸水；保证各组分完全溶解；pH值测定和调整；消毒灭菌分装小瓶，抽样做无菌实验；配制细胞用液器材的清洁要求同细胞培养器材。那么细胞培养用液的分装方法与要求有哪些呢？

动物细胞培养技术已经当今生命科学各领域的基础技术和基本技能，它也是细胞工程、基因工程和生物医学工程的重要研究手段。那我们在实际的动物细胞培养实验中需要注意哪些基本要求呢？

组织分离之后，原代细胞培养即可分为两种：一种将组织块贴附于适宜的基质中，细胞可自组织块向外迁移生长；另一种是将组织块用机械法或酶消化法处理后获得细胞悬液，接种细胞悬液，其中部分细胞最终将黏附于基质开始生长。