细胞培养用液的分装方法与要求

动物细胞培养中常用的液体有平衡盐溶液、消化液、pH调整液、抗菌素液、谷氨酰胺、肝素钠、蛋白酶抑制剂、培养基等。这些液体在配制时有如下要求:使用高纯化的三蒸水;按照用液的配方计算各成分的用量,然后准确称取,并按规定顺序溶于三蒸水中;保证各组分完全溶解;pH值测定和调整;消毒灭菌分装小瓶,抽样做无菌实验;配制细胞用液器材的清洁要求同细胞培养器材。那么细胞培养用液的分装方法与要求有哪些呢?

1.实验器材的使用方法
为防止消毒物品的再污染,实验器材必须无菌操作。细胞用液瓶的打开、吸液、关闭等一切操作都要在超净台安全区进行。
(1)盐水瓶瓶塞的使用
上塞:瓶口消毒,右手拇指、食指塞进胶皮内,将塞旋入消毒瓶口内。瓶口再消毒,瓶直立火焰前方。双手概指、中指固定瓶位双手食指将胶皮外翻。最后用消毒纸包装。
去塞:瓶口消毒后,用消毒镊挑开胶皮。瓶口再消毒,胶塞旋松取出,瓶顺风斜放45℃支架。
(2)青霉素瓶瓶塞的使用
用消毒的台镊取放瓶塞,注意瓶口火焰消毒。贮液瓶塞盖好,封口膜或胶布密封。
(3)吸管的使用
取管:右手松夹筒盖,左手水平抖动管筒,管头端暴露时取管,筒口消毒套盖。吸管套吸头后,火焰上方来回3次待用。
注意:粗口径吸管套前,吸头先用湿酒精棉球沾湿;饭盒存放的吸管,使用时将盒盖开一角,用火焰消毒的台镊将遮布掀起一角,吸管头端暴露,台镊再火焰消毒,将吸管取出,遮布复原,盒盖好。
(4)注射器的使用
安装:针栓、针筒消毒后在安全区套好。台镊消毒将针头固定,字面在上。针头放人消毒管内待用。
使用:瓶口消毒去塞,直立火焰前方,针头插入液面下,左手拿针筒,右手提针栓,缓慢吸出液体。排气和多余液体推入酒精棉球内。
(5)瓶管、盖的使用
盖的使用要求同塞。需使用同一盖时,盖使用面放在酒精棉球上。套盖前,盖使用面火焰消毒。

2.无菌滤液分装
(1)使用正压滤器时,采用边过滤边分装的方法。瓶口的液滴先用微湿酒精棉球吸液,再用干酒精棉球由里向外擦拭,最后,火焰消毒,加塞包装。
(2)使用负压滤器时,借助消毒吸管,将液体移人分装瓶内,瓶口液滴擦拭方法同(1)。
(3)血清﹑酶液少量无菌液体用吸管分装,分装时注意多换吸管。

3.细胞用液的分装要求
(1)根据配量准备分装瓶和塞。分装瓶规格,数量应根据实验需要准备,这与每次、每周实验用量、试剂稳定性等有关。避免包装瓶过大、贮液时间过长或细胞用液反复冻融使用,造成营养成分损失和微生物污染。按一周用量挑选小包装瓶。融化后的液体置4℃保存。
(2)实验前,做好无菌室,超净台的清洁、消毒工作。实验用品清点入台,超净台启动,紫外线消毒40 min。实验试剂恢复室温后,瓶口,瓶外壁酒精消毒入台。台面酒精消毒,点火,台镊消毒入酒精瓶。这样做好了实验准备。
(3)分装前,做好各瓶贮液量标记,瓶液量要小于瓶容积的2/3。牛血清等融化后摇匀
方法是:左手掌心托瓶,右手拿瓶口顺时针方向轻轻转动液体,避免用力过猛而使液体沾染瓶口和塞。
(4)抽滤分装时,尽量减少无菌室开门次数和非操作人员进入。严格无菌操作,尽量缩短试剂在空气中暴露的时间。
(5)比较各分装瓶液体的颜色。将液体颜色过浅的瓶弃去,此现象与瓶泡酸后冲洗不净有关(瓶内残留酸性物质)。分装多瓶时,最后几瓶可能出现颜色加深的现象,这是因为瓶口敞开时间过长,液体CO2逃逸,pH值上升的缘故。颜色过深的液体用醋酸调节后使用。
(6)各试剂瓶标记名称、浓度、配制日期、组号。
(7)抽样(开始、中间、最后瓶)做无菌试验,37℃培养3天。

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