实验指南

对于消化细胞程度，客户如果经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议客户按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37度培养箱，然后每隔30秒，即吹打下细胞（此时吹打细胞应尽量轻柔，不能强行将细胞吹下，否则细胞可能出现机械损伤），如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作直至能够轻柔的吹下细胞。

MG63可以用无血清冻存液冻存。不同品牌的冻存液冻存效果可能不一样，建议冻存后次日复苏一管检测细胞活率及状态没有问题后再将剩余冻存细胞放置液氮中保存。

多数细胞系在pH7.4下生长得很好，尽管如此各细胞株之间，细胞生长最佳pH值还是会有一定差异。一些正常的成纤维细胞系在pH 7.4~7.7牛长最好，而一些转化细胞系在pH 7.0~7.4更合适。据报道，上皮细胞可在pH 5.5维持。为确定最佳pH值，最好做一个简单的生长实验或特殊功能分析。

血清为天然培养基中最为重要和在组织培养中最常使用的天然培养基。血清之所以成为培养中不可少的成分，主要因为血清中含有很多种不可缺少的能维持细胞生长增殖的成分。

体外培养动物细胞已经有近百年的历史，但该技术真正得以广泛应用及各种类型组织细胞大量体外培养成功是由于适合细胞体外生长需要的合成培养基的问世。合成培养基是对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下的模拟。这种模拟不是被动的、不加选择的，而是在体外反复实验和筛选，进行强化和重新组合后形成的人工合成培养基。

吸管主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体，常用的有1 mL、2 mL、5 mL、10 mL等规格。无刻度吸管又有直头吸管和弯头吸管之分。弯头吸管除可作吸取、转移液体外，还常用于吹打、混匀及传代细胞。

无论是原代培养还是细胞系的传代培养，一旦培养开始，就要定期更换或补充培养基。如果细胞持续增殖，随后迟早要进行传代培养。对干不增殖的培养物，也需要定期更换培养基，因为细胞仍会代谢，培养基的某些成分会耗尽或自然降解，产生的代谢废物也需要通过换液去除。

细胞冻存是细胞培养比较大的难点，由于不同细胞特性不同，实际冻存效果也会有差异，如果发现细胞冻存有异常，需尽量调整冻存策略以保证细胞冻存效果。