实验指南

　CRISPR/Cas9基因编辑系统拥有实现复杂基因治疗和细胞工程的巨大潜力。为了实现高效的多重基因编辑，递送系统需要足够的能力将所需量的CRISPR/Cas9 RNA（包括Cas9 mRNA和sgRNA）转染到每个细胞中。

传代或复苏之后，Caco-2需要48小时左右才能完全贴壁。建议将细胞接种至培养器皿后，放进培养箱耐心等待48小时再拿出培养瓶观察，更有利于细胞贴壁。此外还需注意血清对贴壁的影响，血清的比例低于20%时，Caco-2细胞贴壁时间延长，甚至不贴壁。

Hepa1-6细胞是C57/L小鼠肝癌细胞系Hepa-1的衍生系。Hepa1-6细胞细胞表达白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、α1抗胰蛋白酶、淀粉酶基因，经检测鼠痘病毒阴性。Hepa1-6细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究，也是一种合适的转染宿主。

THP-1复苏后恢复较慢，如无特殊情况，复苏后48小时内不对细胞进行操作；THP-1生长需要稳定的环境，不频繁拿出培养箱，不频繁离心；培养时瓶子竖立放置（瓶盖朝上），可增加细胞局部密度，促进细胞增殖。

MRC-5细胞是正常二倍体细胞系，46条染色体、XY核型，模式染色体数为46，概率为70%，多倍体率为3.6%。

A-375细胞是NRAS mutant-A375 isogenic理想对照，可用于3D细胞培养、高通量筛选、毒理学和免疫肿瘤学研究，也是一种合适的转染宿主。

对于消化细胞程度，客户如果经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议客户按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37度培养箱，然后每隔30秒，即吹打下细胞（此时吹打细胞应尽量轻柔，不能强行将细胞吹下，否则细胞可能出现机械损伤），如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作直至能够轻柔的吹下细胞。

MG63可以用无血清冻存液冻存。不同品牌的冻存液冻存效果可能不一样，建议冻存后次日复苏一管检测细胞活率及状态没有问题后再将剩余冻存细胞放置液氮中保存。