实验指南

HepG2细胞是从患有肝癌的15岁白人男性青年的肝细胞癌中分离出来，细胞表达甲胎蛋白、白蛋白α2-巨球蛋白、α1抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α1抗胸腺蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原补体（C4）、C3活化剂、纤维蛋白原、α1酸性糖蛋白、α2-HS糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白等基因。

　CRISPR/Cas9基因编辑系统拥有实现复杂基因治疗和细胞工程的巨大潜力。为了实现高效的多重基因编辑，递送系统需要足够的能力将所需量的CRISPR/Cas9 RNA（包括Cas9 mRNA和sgRNA）转染到每个细胞中。

传代或复苏之后，Caco-2需要48小时左右才能完全贴壁。建议将细胞接种至培养器皿后，放进培养箱耐心等待48小时再拿出培养瓶观察，更有利于细胞贴壁。此外还需注意血清对贴壁的影响，血清的比例低于20%时，Caco-2细胞贴壁时间延长，甚至不贴壁。

Hepa1-6细胞是C57/L小鼠肝癌细胞系Hepa-1的衍生系。Hepa1-6细胞细胞表达白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、α1抗胰蛋白酶、淀粉酶基因，经检测鼠痘病毒阴性。Hepa1-6细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究，也是一种合适的转染宿主。

THP-1复苏后恢复较慢，如无特殊情况，复苏后48小时内不对细胞进行操作；THP-1生长需要稳定的环境，不频繁拿出培养箱，不频繁离心；培养时瓶子竖立放置（瓶盖朝上），可增加细胞局部密度，促进细胞增殖。

MRC-5细胞是正常二倍体细胞系，46条染色体、XY核型，模式染色体数为46，概率为70%，多倍体率为3.6%。

A-375细胞是NRAS mutant-A375 isogenic理想对照，可用于3D细胞培养、高通量筛选、毒理学和免疫肿瘤学研究，也是一种合适的转染宿主。

对于消化细胞程度，客户如果经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议客户按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37度培养箱，然后每隔30秒，即吹打下细胞（此时吹打细胞应尽量轻柔，不能强行将细胞吹下，否则细胞可能出现机械损伤），如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作直至能够轻柔的吹下细胞。