NK-92细胞(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)培养教程

NK-92细胞基本信息
细胞名称:NK-92(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)
细胞别称:NK92;Natural Killer-92;NK-92.05;Neukoplast;aNK
细胞货号:SNL-405
生长特性:悬浮
培养条件:MEMα+20%FBS+0.2mM Inositol+0.1mMβ-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/mL recombinant IL-2+1%P/S
培养环境:空气,95%;二氧化碳(CO2),5%;37℃
细胞简介:NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92细胞对很多恶性细胞有细胞毒性,铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92细胞依赖于重组IL-2的存在,低至10U/mL的剂量足以维持增殖;在缺乏IL-2的情况下,细胞将在72小时内死亡。ATCC通过PCR证实该细胞系Epstein-Barr病毒DNA序列呈阳性。NK-92细胞可以用于3D细胞培养、免疫学研究、毒理研究,也是一种合适的转染宿主。


🔺细胞正常生长形态照片

NK-92细胞培养注意事项
NK-92细胞呈聚团悬浮生长,细胞团较大时需要吹打成小团,防止团块中间的细胞因营养不足而死亡。除非实验需要,不建议经常将细胞吹散成单个细胞,否则细胞状态将变差;
NK-92细胞对培养基和血清要求高,培养基严格按照配方配制,并且应该使用优质血清进行培养;
NK-92细胞对IL-2有依赖性,如果缺少IL-2细胞将很快死亡。需注意IL-2容易降解,若购买商品化完全培养基,要保存得当并在保质期内尽快用完;若自己配制培养基,IL-2可以采用现配现用的方法;
建议常备IL-2,当细胞状态不佳时,额外向培养基中按200U/mL补充IL-2,可有效改善。
NK-92细胞对吹打等机械刺激敏感,不要吹打太多次,注意控制吹打力度轻柔;
NK-92细胞对温度敏感,培养基、PBS需复温至37℃再使用。
NK-92细胞冻存难度较大,建议使用90%FBS+10%DMSO冻存液,冻存密度推荐300万细胞/毫升,不能过低。冻存液中不必加IL-2。冻存时细胞应吹散成单细胞。
NK-92细胞计数时算得的细胞的活率不能代表该细胞真实的状态。因为培养时存在一些散在的单细胞,这些细胞活性较低,且不能完全去除,导致在计数时细胞整体活率可能不高。细胞状态可以通过细胞能否聚团判断:只要大部分细胞能聚团生长,细胞状态就没有问题。当细胞状态不佳时,细胞无法顺利聚团。

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