细胞攻略 | HepG2(人肝癌细胞)培养教程

细胞基本信息

▲细胞正常生长形态照片

细胞名称:HepG2(人肝癌细胞)

细胞别称:HEP-G2;Hep G2;HEP G2;Hep-G2;HEPG2

细胞货号:SNL-083

生长特性:贴壁

培养条件:EMEM(MEM+NEAA)+10%FBS+1%P/S

培养环境:空气,95%;二氧化碳(CO2),5%;37℃

细胞简介:HepG2细胞是从患有肝癌的15岁白人男性青年的肝细胞癌中分离出来,细胞表达甲胎蛋白、白蛋白α2-巨球蛋白、α1抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α1抗胸腺蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原补体(C4)、C3活化剂、纤维蛋白原、α1酸性糖蛋白、α2-HS糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白等基因。HepG2细胞表达标志物包括胰岛素;胰岛素样生长因子II(IGF II)。HepG2细胞表现3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶和肝甘油三酯脂肪酶活性,对葛兰素酮(氧化应激)的刺激表现为apoA-I mRNA表达减少、过氧化氢酶mRNA表达增加。没有证据表明HepG2细胞中存在乙型肝炎病毒基因组。除了基于原始出版物(PubMed:6248960)的所称的肝细胞癌或肝癌细胞系外,HepG2也被称为肝母细胞瘤细胞系(PubMed:19751877)。HepG2细胞系由Wistar研究所保藏,是合适的转染宿主。

HepG2细胞培养注意事项

1、空泡现象

HepG2细胞中常有空泡,这是该细胞正常特性,不影响细胞生长,无需担心。

2、细胞生长慢

培养条件适宜的情况下,在T25培养瓶中生长的HepG2细胞,以1:2传代后,培养2-3天可以到达80%汇合率。若细胞生长过慢甚至不生长,可将血清增加至15%-20%(不要超过20%),待细胞恢复生长速度后再将血清比例降低到10%。
细胞接种密度不可过低,否则生长非常缓慢。

3、细胞聚团或不贴壁

血清品牌和培养基pH是影响HepG2细胞贴壁性的关键因素。

通常HepG2细胞呈单层生长,但遇到不合适的血清细胞可能呈现聚集倾向,最终聚团且不易消化开;也可能贴壁性变弱,漂浮细胞变多。使用高质量低内毒素未灭活的胎牛血清,可以帮助细胞更好地贴壁及形成单层细胞。

pH过高过低都将影响细胞贴壁性,每天观察培养器皿中培养基的颜色,偏黄及时换液,偏紫时检查培养箱CO2供应是否正常,培养瓶是否透气,并及时换液。

4、漂浮细胞多

排除上文中提到的血清和pH对细胞贴壁的影响,传代或复苏后若有部分细胞漂浮,是正常现象,随着培养部分漂浮细胞会逐渐贴壁。漂浮细胞较多时不要扔,使用台盼蓝检查细胞活性,若大部分是活细胞,将这些细胞离心收集后重新接种至原瓶。增加血清量(总比例不超过20%)可以促进贴壁。

消化时需注意时间不能太长,第一次消化该细胞要摸索最佳时间(操作见后文)。中和时轻柔吹打,控制吹打次数和力度,可有效减少传代后漂浮细胞。

5、有圆形细胞粘附在贴壁的单层细胞上

这在HepG2培养时是常见现象,这些细胞可能是尚未完全贴壁或者正处于分裂期的细胞,无需对此特殊处理。

HepG2细胞传代方法

1.准备所需的培养基、胰酶、PBS、离心管、培养瓶以及无菌枪头等;(试剂提前预热)

2.抽走培养瓶内培养基,加5mL PBS润洗1-2遍,清除残留培养基;

3.尽量吸干润洗的PBS后加1mL胰酶,摇晃使胰酶均匀覆盖瓶底,放置培养箱37℃消化;

4.消化时每隔1min拿出来观察,镜下可见细胞明显回缩,轻拍培养瓶部分细胞开始脱落时立即加入3-4mL含血清的培养基终止消化,吹落贴壁的细胞;
Tips:注意控制吹打力度轻柔,吹打次数不可过多,避免机械损伤

5.将细胞悬液转移至离心管中,1000rpm,3min离心收集细胞;

6.在新的培养瓶中加入适量新鲜培养基;(T25推荐10mL,T75推荐15mL)

7.离心完成后,弃上清,加入适量新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞,将细胞悬液均匀接种至培养瓶中,十字法或8字法混匀,然后放入培养箱中继续培养,注意培养瓶盖透气;
Tips:推荐传代比例1:2-1:4,首次传代建议1:2。细胞生长至80%密度时即可传代。

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