细胞基本信息
▲细胞正常生长形态照片
细胞名称:HepG2(人肝癌细胞)
细胞别称:HEP-G2;Hep G2;HEP G2;Hep-G2;HEPG2
细胞货号:SNL-083
生长特性:贴壁
培养条件:EMEM(MEM+NEAA)+10%FBS+1%P/S
培养环境:空气，95%；二氧化碳(CO2)，5%；37℃
细胞简介:HepG2细胞是从患有肝癌的15岁白人男性青年的肝细胞癌中分离出来，细胞表达甲胎蛋白、白蛋白α2-巨球蛋白、α1抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α1抗胸腺蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原补体（C4）、C3活化剂、纤维蛋白原、α1酸性糖蛋白、α2-HS糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白等基因。HepG2细胞表达标志物包括胰岛素；胰岛素样生长因子II（IGF II）。HepG2细胞表现3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶和肝甘油三酯脂肪酶活性，对葛兰素酮（氧化应激）的刺激表现为apoA-I mRNA表达减少、过氧化氢酶mRNA表达增加。没有证据表明HepG2细胞中存在乙型肝炎病毒基因组。除了基于原始出版物（PubMed:6248960）的所称的肝细胞癌或肝癌细胞系外，HepG2也被称为肝母细胞瘤细胞系（PubMed:19751877）。HepG2细胞系由Wistar研究所保藏，是合适的转染宿主。
HepG2细胞培养注意事项
1、空泡现象
HepG2细胞中常有空泡，这是该细胞正常特性，不影响细胞生长，无需担心。
2、细胞生长慢
培养条件适宜的情况下，在T25培养瓶中生长的HepG2细胞，以1:2传代后，培养2-3天可以到达80%汇合率。若细胞生长过慢甚至不生长，可将血清增加至15%-20%（不要超过20%），待细胞恢复生长速度后再将血清比例降低到10%。
细胞接种密度不可过低，否则生长非常缓慢。
3、细胞聚团或不贴壁
血清品牌和培养基pH是影响HepG2细胞贴壁性的关键因素。
通常HepG2细胞呈单层生长，但遇到不合适的血清细胞可能呈现聚集倾向，最终聚团且不易消化开；也可能贴壁性变弱，漂浮细胞变多。使用高质量低内毒素未灭活的胎牛血清，可以帮助细胞更好地贴壁及形成单层细胞。
pH过高过低都将影响细胞贴壁性，每天观察培养器皿中培养基的颜色，偏黄及时换液，偏紫时检查培养箱CO2供应是否正常，培养瓶是否透气，并及时换液。
4、漂浮细胞多
排除上文中提到的血清和pH对细胞贴壁的影响，传代或复苏后若有部分细胞漂浮，是正常现象，随着培养部分漂浮细胞会逐渐贴壁。漂浮细胞较多时不要扔，使用台盼蓝检查细胞活性，若大部分是活细胞，将这些细胞离心收集后重新接种至原瓶。增加血清量（总比例不超过20%）可以促进贴壁。
消化时需注意时间不能太长，第一次消化该细胞要摸索最佳时间（操作见后文）。中和时轻柔吹打，控制吹打次数和力度，可有效减少传代后漂浮细胞。
5、有圆形细胞粘附在贴壁的单层细胞上
这在HepG2培养时是常见现象，这些细胞可能是尚未完全贴壁或者正处于分裂期的细胞，无需对此特殊处理。
HepG2细胞传代方法
1.准备所需的培养基、胰酶、PBS、离心管、培养瓶以及无菌枪头等；（试剂提前预热）
2.抽走培养瓶内培养基，加5mL PBS润洗1-2遍，清除残留培养基；
3.尽量吸干润洗的PBS后加1mL胰酶，摇晃使胰酶均匀覆盖瓶底，放置培养箱37℃消化；
4.消化时每隔1min拿出来观察，镜下可见细胞明显回缩，轻拍培养瓶部分细胞开始脱落时立即加入3-4mL含血清的培养基终止消化，吹落贴壁的细胞；
Tips：注意控制吹打力度轻柔，吹打次数不可过多，避免机械损伤
5.将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm，3min离心收集细胞；
6.在新的培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐10mL，T75推荐15mL）
7.离心完成后，弃上清，加入适量新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，十字法或8字法混匀，然后放入培养箱中继续培养，注意培养瓶盖透气；
Tips：推荐传代比例1:2-1:4，首次传代建议1:2。细胞生长至80%密度时即可传代。