▲细胞正常生长形态照片
细胞名称：Hepa1-6(小鼠肝癌细胞)
细胞别称：HEPA 1-6; Hepa-1-6; Hepa 1-6
细胞货号: SNL-118
生长特性: 贴壁
培养条件: DMEM+10%FBS+1mM Sodium Pyruvate+1% P/S
培养环境: 空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%
细胞简介: Hepa1-6细胞是C57/L小鼠肝癌细胞系Hepa-1的衍生系。Hepa1-6细胞细胞表达白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、α1抗胰蛋白酶、淀粉酶基因，经检测鼠痘病毒阴性。Hepa1-6细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究，也是一种合适的转染宿主。
Hepa1-6细胞培养注意事项
01培养时细胞碎片可能会比较多
如果在密度较大时传代，碎片数量也随之增加。碎片较多时，通过PBS润洗和换液清除碎片。
02细胞形态多变
这与细胞密度、实际培养条件和操作相关。Hepa1-6在低密度和高密度状态下，形态有较大差异。低密度时细胞形态各异，呈多角形；高密度时细胞形态更均一，呈铺路石状。有少部分贴壁细胞呈发亮的球形，是正常现象。
03细胞贴壁较弱
Hepa1-6细胞贴壁弱，消化时间偏短，注意控制消化时间。操作步骤见下文。
Hepa1-6细胞传代方法
1. 准备所需的培养基、胰酶、PBS、离心管、培养瓶以及无菌枪头等；（试剂提前预热）
2. 抽走培养瓶内培养基，加5mL PBS润洗1-2遍，清除残留培养基；
3. 尽量吸干润洗的PBS后加1mL胰酶，摇晃使胰酶均匀覆盖瓶底，放置培养箱37℃消化；
4. 消化时每隔1min拿出来观察，镜下可见细胞明显回缩，轻拍培养瓶部分细胞开始脱落时立即加入3-4mL含血清的培养基终止消化，吹落贴壁的细胞；
Tips：注意控制吹打力度轻柔，吹打次数不可过多，避免机械损伤
5. 将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm，3min离心收集细胞；
6. 在新的培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐10mL，T75推荐15mL）
7. 离心完成后，弃上清，加入适量新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，十字法或8字法混匀，然后放入培养箱中继续培养，注意培养瓶盖透气；
Tips：推荐传代比例1:2-1:4，首次传代建议1:2。细胞生长至80%密度时即可传代。
Hepa1-6细胞冻存方法
1. 配制程序性冻存液，准备相应数量冻存管并做好标记。
Tips：推荐冻存液配方92%FBS+8%DMSO或92%完全培养基+8%DMSO
2. 先将细胞按传代步骤消化、离心、弃上清，获得细胞沉淀；
3. 加入适量程序性冻存液轻轻重悬细胞，并将细胞悬液转移至冻存管中；
4. 将冻存管放入程序性冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；
5. 转移冻存细胞至液氮保存并登记细胞保存位置
Tips：液氮保存24h后建议复苏一管检测冻存细胞的活性，若活性合格即可长期保存。程序性冻存液需要配合程序性冻存盒使用，若使用非程序冻存液请按产品说明书处理降温过程。T25培养瓶长满通常可冻存2-3管，10cm皿长满通常可冻存3-4管。冻存密度低将导致复苏后细胞状态不佳。
Hepa1-6细胞复苏方法
1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基复温至室温或37℃，离心机设置好转速；
2. 将细胞从液氮罐取中出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入水浴锅迅速摇晃，细胞融化至米粒大小冰块时终止水浴，融化过程不超过2min；
Tips：若液氮或冰箱距离细胞房较远，细胞需要放在干冰或冰盒上运送至细胞房。冻存管在液氮长期保存过程中难免渗入液氮，取出细胞时震动不要过大。水浴前一定要观察管内是否存在液氮，若有液氮需静置一会待液氮完全蒸发后再水浴。做好防护，避免冻存管炸开导致受伤。水浴时使用一次性PE手套包住冻存管避免直接接触水源，避免污染。
3. 直接将冻存管以离心力150g(约900rpm)左右离心2min，不同离心机具体转速会有差异
4. 离心完成后弃上清，用预热的培养基缓慢加入冻存管，轻柔重悬细胞后接种至培养瓶中，轻轻混匀后放入培养箱；
5. 复苏24h后观察并换液一次，放回培养箱继续培养。
Tips：整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成。
Hepa1-6细胞收货攻略
常温细胞
1. 收货后，拆开外包装，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培养箱静置4h以上；
2. 吸走大部分培养基并留10-12 mL，显微镜下拍照保存细胞状态照片，观察细胞密度，若细胞密度大于80%即可按比例传代（首次传代比例建议1：2），若细胞密度低于70%可以留10-12 mL继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养；
冻存细胞
1. 细胞收货后尽快开箱检查，若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天内复苏）短期保存或液氮中长期保存，若干冰完全挥发建议立即复苏细胞并联系销售人员解决；
2. 冻存细胞建议尽快复苏一管培养检查，以免超出售后期，复苏步骤参考复苏攻略；
3. 复苏一管细胞出现异常及时联系销售人员，在专业技术支持的指导下进行下一步操作；
Tips：
1. 细胞收货出现漏液、培养瓶破损、干冰完全挥发等异常情况时，及时拍照联系销售人员；
2. 尚恩生物T25瓶发货的细胞内含对应细胞的完全培养基，可以收集原装培养瓶内培养基经1500rpm离心5min后，取上清于4℃保存用于后续细胞培养；