一、HCT116+luc细胞基本属性 |
|
| 细胞名称 | HCT116+luc(人结肠癌细胞（luc标记）) |
| 细胞别称 | HCT1116-LUC; HCT116-luc; HCT116(LUC) |
| 细胞货号 | SNL-578 |
| 来源 | 结肠腺癌；男性；成年；荧光素酶标记 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | McCoy's 5a+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | HCT116+luc细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因，随细胞传代次数的增加，其Luc荧光强度会逐渐减弱，若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/mL。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可再次加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。 |
二、HCT116+luc细胞培养操作 |
|
| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、HCT116+luc细胞冻存操作 |
|
| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条； 2.细胞为稳定转染Luc的细胞，随细胞传代次数的增加，其Luc荧光强度会逐渐减弱，若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
我们推荐使用尚恩生物 人结肠癌细胞（luc标记）专用培养基（产品货号：SNLM-578）作为HCT116+luc(人结肠癌细胞（luc标记）)的专用培养基。
