一、MC3T3-E1细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | MC3T3-E1(小鼠颅顶前骨细胞) |
| 细胞别称 | Mc3T3-E1；MC3T3E1；MC-3T3-E1；MC3T3-E1 |
| 细胞货号 | SNL-518 |
| 来源 | 胚胎/新生鼠；颅骨；C57BL/6；小于1日龄 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | CCTCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | EMEM(MEM+NEAA)+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | MC3T3-E1细胞从C57BL/6小鼠颅骨中建立，并基于静息状态下的选择高碱性磷酸酶（ALP）活性。MC3T3-E1细胞具有分化成成骨细胞和骨细胞的能力，并已被证明可以在体外形成钙化的骨组织，矿物沉积已被鉴定为羟基磷灰石。MC3T3-E1细胞的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA和蛋白的表达已被证明可以通过TGF-β和bFGF的处理来调节。据报道，前列腺素F2a可以通过上调MC3T3-E1细胞胰岛素样生长因子I受体来刺激DNA合成和增殖。MC3T3-E1细胞分泌胶原并在RNA中表达小鼠白血病抑制因子（mLIF）。 |
二、MC3T3-E1细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、MC3T3-E1细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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