一、NCI-H295R细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | NCI-H295R(人肾上腺皮质腺癌细胞) |
| 细胞别称 | NCI H295R; NCIH295R; H295R; H-295R; H295R-S1 |
| 细胞货号 | SNL-391 |
| 来源 | 肾上腺皮质癌；女性；48岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | DMEM/F12+10% FBS+6.25ug/mL Insulin+6.25ug/mL Transferrin+5.35ng/mL Selenium+5.35ug/mL Linoleic acid+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | NCI-H295R细胞是源于多能肾上腺皮质癌细胞系NCI-H295细胞，后者由Gazdar·A·F等从一名48岁黑人女性患者肾上腺皮质的肿瘤中分离而来。NCI-H295细胞经改变培养条件使群体倍增时间从原来的5天减为2天获得了NCI-295R细胞。NCI-295细胞悬浮生长，而NCI-H295R细胞呈单层贴壁生长。NCI-H295R细胞保留了产生雄激素的能力，对血管紧张素Ⅱ和钾离子有反应。NCI-H295R细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究。 |
二、NCI-H295R细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NCI-H295R细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.该细胞培养时黑点较多，具体原因与处理方法参考操作说明2、3条； 2.细胞生长速度偏慢，注意控制传代密度不要过低； 3.该细胞正常生长需要添加细胞因子，建议使用我司专用培养体系，货号：SNLM-391；
我们推荐使用尚恩生物 人肾上腺皮质腺癌细胞专用培养基（产品货号：SNLM-391）作为NCI-H295R(人肾上腺皮质腺癌细胞)的专用培养基。
