一、MB49细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | MB49(小鼠膀胱癌细胞) |
| 细胞别称 | MB-49 |
| 细胞货号 | SNL-256 |
| 来源 | 膀胱癌；雄性； C57BL/ICRF-a(t)；成年 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | Millipore |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | MB49细胞来源于C57BL/Icrf-a(t)小鼠膀胱上皮细胞，该细胞在长期原代培养的第二天通过化学致癌物7, 12-二甲基四苯（DMBA；二甲基苯并蒽）单次24小时处理转化。MB49细胞移植到同基因小鼠中会产生癌。MB49细胞虽然是雄性来源，但核型分析表明，所分析的细胞中100%的Y染色体丢失，这种异常是人类膀胱癌的常见早期培养事件。最近的一项研究表明，MB49细胞概括了膀胱肿瘤生长中性别差异的关键特征，在小鼠中植入MB49细胞发现雄性小鼠的肿瘤明显大于雌性小鼠。在二氢睾酮的存在下，MB49细胞表现出剂量依赖的增殖增强。同时，MB49细胞对妊娠激素、人绒毛膜促性腺激素（hCG）无反应。MB49细胞MHC I类和II类分子的低表达或无表达，然而，IFN-gamma处理后 MHC I类和II类的表达显著上调。 |
二、MB49细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、MB49细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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