一、ARPE-19细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | ARPE-19(人视网膜色素上皮细胞) |
| 细胞别称 | ARPE19；AdultRetinalPigmentEpithelialcellline-19；NTC-200；NTC200 |
| 细胞货号 | SNL-227 |
| 来源 | 视网膜色素上皮；自发永生；19岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | ARPE-19细胞是一种自发产生的视网膜色素上皮（RPE）细胞系，来源于一名19岁男性的正常眼睛，该男性死于机动车事故中的头部创伤。ARPE-19细胞在DMEM培养基和Ham's F12培养基的1:1混合物中建立，培养基含有HEPES缓冲液、20%胎牛血清、56mM终浓度碳酸氢钠和2mM L-谷氨酰胺，并在37℃和10%CO2中孵育。在传代组织块底层细胞前对细胞进行了前四代选择性胰蛋白酶处理以去除表面细胞，到第5代时，培养物即是快速生长的RPE细胞，其形成鹅卵石单层，在培养数月后着色，细胞形成稳定的单层，表现出形态和功能极性。ARPE-19细胞在低血清浓度的培养基中，将细胞涂布在层粘连蛋白涂层的Transwell COL膜上时，细胞表现出形态学极化。ARPE-19细胞在培养4周后，它们形成紧密的连接，单层的跨上皮电阻达到最大50至100欧姆/cm2。ARPE-19细胞表达RPE特异性标记物CRALBP和RPE-65，细胞为二倍体，可传30代以上，在ATCC鉴定期间进行的长寿试验中，发现子代又可以进行另外48次传代。ARPE-19细胞可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。 |
二、ARPE-19细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、ARPE-19细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条；
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