一、CALU-3细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | CALU-3(人肺腺癌(胸水细胞)) |
| 细胞别称 | CaLu-3；CALU-3；Calu3；Calu3；CALU3 |
| 细胞货号 | SNL-214 |
| 来源 | 肺腺癌；胸腔积液转移；男性；25岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | Yes, forms well differentiated grade I adenocarcinoma in nude mice |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | Calu-3上皮细胞是从一名25岁白人男性肺腺癌患者的肺组织中分离出来的，该患者曾接受过环磷酰胺、博莱霉素和阿霉素的治疗。Calu-3细胞对SARS-CoV-2的体外繁殖有用，是一种合适的转染宿主，在癌症和毒理学研究中有应用。 |
二、CALU-3细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、CALU-3细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞贴壁较紧，消化时间偏长；消化时边缘细胞先脱落，可以吸取正在消化的胰酶吹下细胞收集到装有完全培养基的离心管中，再加新的胰酶继续消化剩下的细胞； 2.细胞生长十分缓慢，传代建议按1:2，传代前密度不要过低； 3.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条； 4.培养时有部分细胞会漂浮死亡，漂浮细胞过多时及时换液清除；
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