一、LLC细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | LLC(小鼠肺癌细胞) |
| 细胞别称 | LL/2 (LLC1); LL/2 (LLc1); LL/2(LLc1); LL/2; LL2; LLC1; LLC; Lewis lung carcinoma line 1; Lewis lung carcinoma; Lewis-Lung; Lewis Lung |
| 细胞货号 | SNL-119 |
| 来源 | 肺癌；C57BL/6 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | Yes, in C57BL mice. |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | LLC细胞是一种从C57BL小鼠的肺中建立的细胞系，该小鼠携带由原发性Lewis肝癌植入引起的肿瘤。LLC细胞对1, 3-双-（2-氯乙基）-1-亚硝基脲有抗性，但对甲氨蝶呤敏感。据报道，LLC细胞具有高度致瘤性，可以在C57BL小鼠成瘤，但在小鼠中转移性较弱。LLC细胞在培养瓶中形成多层，但实际上没有融合。LLC细胞鼠痘病毒阴性，被广泛用作转移模型，并有助于研究癌症化疗药物的机制。 |
二、LLC细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、LLC细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间； 2.注意控制细胞密度，过高或者过低都可能影响细胞状态，不要长时间高密度培养； 3.细胞密度过高时及时传代，避免培养基变黄导致细胞脱落或者状态变差； 4.细胞生长较快，注意及时换液及传代； 5.细胞传代容易成团聚集，注意尽量吹散细胞；
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