一、CT26.WT细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | CT26.WT(小鼠结肠癌细胞) |
| 细胞别称 | CT26WT |
| 细胞货号 | SNL-117 |
| 来源 | 结肠腺癌； BALB/c |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | Yes, in BALB/c mice. Mice inoculated, subcutaneously, developed lethal tumors at 80% frequency with 1×10^3 cells and at 100% with 1×10^4 cells. Pulmonary metastases developed when mice were inoculated, intravenously, with 1×10^4 cells. |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | CT26细胞是以N-亚硝基-N-甲基氨基甲酸酯(NNMU)诱导形成的未分化结肠癌细胞株，它克隆形成的细胞株命名为CT26.WT。用包含编码典型肿瘤相关抗原(TAA)β-半乳糖苷酶(β-gal)、lacZ基因的逆转录病毒载体LXSN稳定转染CT26.WT细胞，得到致死的亚克隆CT26.CL25。即使CT26.CL25细胞表达了典型的TAA-β-半乳糖苷酶，在正常小鼠中CT26.CL25细胞和CT26.WT细胞的生长率与致死率也保持基本一致。CT26.WT细胞与CT26.CL25细胞一起可用作测试免疫治疗程序的模型，并用于研究宿主免疫反应。2001年7月提交给ATCC的培养物被发现被支原体污染，通过用BM Cycline治疗21天治愈后代，治疗后6周，通过Hoechst染色、PCR和标准培养试验对细胞进行支原体检测，所有测试均为阴性。CT26细胞可以用于3D细胞培养。 |
二、CT26.WT细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、CT26.WT细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间； 2.注意控制细胞密度，过高或者过低都可能影响细胞状态，不要长时间高密度培养； 3.细胞密度过高时及时传代，避免培养基变黄导致细胞脱落或者状态变差； 4.细胞生长较快，注意及时换液及传代； 5.细胞传代容易成团聚集，注意尽量吹散细胞；
我们推荐使用尚恩生物 小鼠结肠癌细胞专用培养基（产品货号：SNLM-117）作为CT26.WT(小鼠结肠癌细胞)的专用培养基。
