一、B16细胞基本属性 |
|
| 细胞名称 | B16(小鼠黑色素瘤细胞) |
| 细胞别称 | B-16；B16melanoma；B16sublineB78；B78 |
| 细胞货号 | SNL-115 |
| 来源 | 黑色素瘤；雄性；C57BL/6 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样(梭形或多角形有触角) |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | 中科院NCACC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | B16细胞是一株来自C57BL/6小鼠皮肤的黑素瘤细胞，黑色素生成阳性，但大部分细胞无色素。据报道，细胞在部分培养条件下可能分泌大量黑色素。尚恩生物确认细胞使用DMEM（GIBCO 12800082）培养时出现过大量黑色素表达情况，另外无论细胞是否在体外培养时产生黑色素，接种至C57BL/6小鼠体内后，瘤体均呈黑色。B16可以用于皮肤癌研究，也是一种合适的转染宿主。 |
二、B16细胞培养操作 |
|
| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、B16细胞冻存操作 |
|
| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞培养时可能会有部分黑点，具体原因参见培养操作说明2、3条； 2.细胞生长较快，注意及时换液及传代； 3.不建议使用高糖DMEM或长时间高密度培养，会导致细胞黑色素分泌；
我们推荐使用尚恩生物 小鼠黑色素瘤细胞专用培养基（产品货号：SNLM-115）作为B16(小鼠黑色素瘤细胞)的专用培养基。
