一、SiHa细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | SiHa(人子宫颈鳞癌细胞) |
| 细胞别称 | Siha；SIHA |
| 细胞货号 | SNL-064 |
| 来源 | 宫颈鳞状细胞癌；女性；55岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 [Cells contain human papilloma virus] |
| 致瘤性 | Yes, in nude mice; forms poorly differentiated epidermoid carcinoma (grade III). |
| 培养条件 | EMEM(MEM+NEAA)+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | SiHa细胞是从一名55岁女性日本鳞状细胞癌患者的原发性子宫组织样本碎片中分离出来的细胞系，细胞表达p53+和pRB+基因，1975年发现并消除了支原体污染。电镜观察表明，在SiHa细胞连接处有典型的桥粒，在SiHa细胞胞质中有丰富的张力丝。在裸鼠中，SiHa细胞能形成低分化的表皮样癌(Ⅲ级)。据报道，SiHa细胞含有完整的人乳头瘤病毒16型基因组（HPV-16，每个细胞1至2个拷贝），但E2区被破坏，并有少量缺失。SiHa细胞可以用于3D细胞培养、癌症研究、传染病研究、性传播疾病研究，也是一种合适的转染宿主。 |
二、SiHa细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、SiHa细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞培养时可能会有部分黑点，属正常现象，具体原因参见培养操作说明2、3条；
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