一、U87MG+luc细胞基本属性 |
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细胞名称 | U87MG+luc(人脑星形胶质母细胞瘤细胞(luc标记)) |
细胞别称 | U-87MG-luc;U-87MG-luc;U87MG-luc;U-87-MG-luc;U87-MG-luc;U87MG(luc);U-87-luc;U87-luc;87MG-luc |
细胞货号 | SNL-649 |
来源 | 星形胶质母细胞瘤;男性 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞类型 | |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | 自转 |
生物安全等级 | 2 |
致瘤性 | |
培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | U87MG+luc细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱,若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/mL。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可再次加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。 |
二、U87MG+luc细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、U87MG+luc细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞贴壁较弱,消化时间偏短,注意控制消化时间; 2.注意控制细胞密度,过高或者过低都可能影响细胞状态,不要长时间高密度培养; 3.细胞传代容易成团聚集,注意尽量吹散细胞; 4.细胞培养时黑点可能会比较多,具体原因参见培养操作说明2、3条; 5.细胞为稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱,若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
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