一、U14细胞基本属性 |
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细胞名称 | U14(小鼠子宫颈癌细胞) |
细胞别称 | / |
细胞货号 | SNL-591 |
来源 | 宫颈癌;雌性;615小鼠 |
细胞形态 | 圆形/上皮细胞样 |
细胞类型 | |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | 协和细胞库PUMC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | U14细胞于1958年建立,用含20-甲基胆蒽的线结穿入KM幼鼠宫颈诱发癌后,瘤细胞悬液接种雌鼠皮下移植及传代。 |
二、U14细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、U14细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.该细胞为贴壁细胞,由于腹水传代后才会悬浮生长,因此腹水传代过的细胞在体外培养时贴壁会逐渐变多变紧,所以细胞实际贴壁情况可能会有一定程度变化; 2.有部分细胞悬浮生长时,可以视贴壁细胞多少及状态决定是否保留悬浮细胞;
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