一、GP2d细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | GP2d(人结肠癌细胞) |
| 细胞别称 | Gp2d; Gp2D; GP2D |
| 细胞货号 | SNL-582 |
| 来源 | 结肠腺癌；女性；71岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ECACC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | GP2d和GP5d一样从相同的腺癌中建立。这些细胞来源于一位71岁女性手术切除后局部复发的Duke B级低分化结肠癌。患者术前未接受化疗或放疗，有结肠癌家族史，两名一级亲属在55岁以下死于结肠癌。这两个细胞都具有与结肠癌肿瘤进展模式一致的遗传变化，但在形态上是不同的。据报道，5号染色体(14q至22q）中间缺失和10q11和10q21带的反向重复。这两种细胞系都含有ki-ras基因的正常拷贝和密码子12转移的拷贝。随着细胞数量的增加，GP2d细胞对EGF、TGF α或胰岛素表现出生长反应。双调蛋白(Amphiregulin)mRNA在GP2d中含量丰富，而在GP5d中几乎检测不到。 |
二、GP2d细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、GP2d细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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