一、CTX TNA2细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | CTX TNA2(大鼠星形胶质细胞) |
| 细胞别称 | 无 |
| 细胞货号 | SNL-552 |
| 来源 | 大脑；1型星形胶质；SD大鼠；1日龄 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | No, the cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice, but did form colonies in semisolid medium. |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | CTX-TNA2细胞由来自1天大鼠大脑额叶皮层组织的1型星形胶质细胞的原代培养物建立，在人GFAP启动子（pGFA-SV-Tt）和含有鼠磷酸甘油酸激酶基因启动子的pPGK-neo的转录控制下，用含有SV40致癌早期区域的DNA构建体在初始平板3天后转染培养物，然后用G418筛选并克隆转染的细胞。CTX-TNA2细胞保留了与1型星形胶质细胞表型一致的特征，约20%的细胞具有胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫反应性。细胞对γ-氨基丁酸（GABA）具有高亲和力摄取机制，该机制可被β-丙氨酸抑制。细胞产生的α2巨球蛋白的量与原代星形胶质细胞中发现的量相似，但产生的转铁蛋白的量要少得多。CTX-TNA2细胞不产生脑啡肽原A，不表达2型星形胶质细胞特有的O4或A2B5表位，也不表达半乳糖苷，通过免疫染色，在95%以上的细胞的细胞核中发现SV40 T抗原。 |
二、CTX TNA2细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、CTX TNA2细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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