一、MCF-7/Adr细胞基本属性 |
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细胞名称 | MCF-7/Adr(人乳腺癌阿霉素耐药细胞株[MCF7亚株]) |
细胞别称 | MCF-7/ADR;MCF7-ADR |
细胞货号 | SNL-537 |
来源 | 浸润性导管癌;胸腔积液转移;女性;69岁 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞类型 | |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | 自筛 |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | 1640+10% FBS+500ng/mL ADR+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | MCF-7/Adr为由MCF-7细胞构建的耐Adr(Adriamycin,阿霉素)药物耐药细胞株,可以在500ng/mL Adr条件下存活并传代。 |
二、MCF-7/Adr细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、MCF-7/Adr细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.收到细胞后建议及时培养并在细胞状态良好时冻存部分细胞,以避免细胞传代数高耐药能力下降; 2. 细胞复苏后初次培养时不建议直接添加Adr,可以当细胞汇合度达约80%时,再加入400ng/mL ADR的完全培养基培养至细胞完全融合后传代。细胞传代1~2次后仍能保持增殖,即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养;若此过程中细胞停止增殖,且状态较差,则需降低药物浓度(首次降低一半药物浓度)或使用不含药物的完全培养基培养,至细胞汇合度达80%左右,且生长状态较好时,再更换为所需的ADR药物浓度; 3. 细胞冻存过程中,不可添加药物; 4.建议将Adr配制成1mg/mL的母液,即使用10mL PBS溶液溶解10mg Adr,使其完全溶解后,使用0.22um滤器过滤除菌。可根据用量配置药物,并将药物分装保存,避免反复冻融导致药物失效。
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