一、E14TG2a[暂不提供]细胞基本属性 |
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细胞名称 | E14TG2a(小鼠胚胎干细胞)[暂不提供] |
细胞别称 | ES-E14TG2a;E14TG2a;E14Tg2a;E14tg2a;E14.Tg2a |
细胞货号 | SNL-528 |
来源 | 胚胎;雄性;129/Ola |
细胞形态 | 成球生长 |
细胞类型 | |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | DMEM+15% FBS+1%NEAA+55uM β-mercaptoethanol+5ug/mL LIF+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | ES-E14TG2a细胞是从小鼠胚胎中分离的胚泡衍生的胚胎干细胞系,是M.Hooper于1987年开发的几种胚胎干细胞(ES)系之一的衍生物。ES-E14TG2a细胞缺乏HGPRT(HPRT),并且对0.06mM 6-硫鸟嘌呤具有抗性,在饲养层(胚胎成纤维细胞或STO细胞)上培养时,细胞保持未分化,在没有饲养层的情况下,细胞自发分化并形成胚胎结构。当ES-E14TG2a注射到胚泡中时,这些细胞可以定植于生殖细胞系。在常规的分子基因修饰技术之后,ES-E14TG2a细胞可以用于重建小鼠胚胎。 |
二、E14TG2a[暂不提供]细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、E14TG2a[暂不提供]细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.该细胞缺乏 HGPRT(HPRT),并且对 0.06 mM 的 6-硫鸟嘌呤有抗性。当在饲养层(胚胎成纤维细胞或 STO 细胞)上培养时,细胞保持未分化状态。在没有饲养层的情况下,细胞自发分化并形成胚胎结构;
我们推荐使用尚恩生物 小鼠胚胎干细胞专用培养基(产品货号:SNLM-528)作为E14TG2a(小鼠胚胎干细胞)[暂不提供]的专用培养基。