一、EL-4-B5细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | EL-4-B5(小鼠胸腺淋巴瘤细胞) |
| 细胞别称 | EL-4B5；EL4-B5；EL4B5 |
| 细胞货号 | SNL-522 |
| 来源 | T细胞淋巴瘤/白血病；C57BL/6N |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 半贴壁细胞 |
| 收录 | Kerafast |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | EL-4-B5细胞是小鼠EL4胸腺瘤的亚克隆，它是一种溴脱氧尿苷抗性突变体，可以用作产生人单克隆抗体的B细胞的饲养层。 用甲烷磺酸乙酯对产生IL-2的EL-4小鼠胸腺瘤细胞进行诱变产生了T细胞杂交瘤的融合伴侣，然后发现胸苷激酶缺陷和瓦巴因抗性克隆EL-4 BurOUr 6.1，该细胞可以通过细胞接触激活小鼠和人B细胞。亚克隆后获得EL-4-B5细胞，该细胞强烈激活B细胞。EL4-B5与B细胞一起生长，以通过直接细胞接触激活B细胞，从而诱导增殖、分化和抗体分泌。EL-4-B5细胞系提供了一种从用荧光VLP选择的单个抗原特异性B细胞克隆产生重组人mAb的方法，并且可以用于产生许多其他病毒的人mAb，这些病毒的蛋白质可以自组装成VLP。 |
二、EL-4-B5细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.轻轻吸走培养上清，留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞； 2.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 4.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 半贴壁细胞会附着瓶底，但贴壁不紧，轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响。 |
三、EL-4-B5细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞悬浮或贴壁、圆形或不规则形态生长，偶有小聚团； 2.圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞，如果无法判断，可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率； 3.悬浮细胞密度维持1E5-5E5/mL之间，密度过低或者过高可能会影响细胞状态； 4.细胞圆形或多角形，贴壁或悬浮生长，传代时均可收集培养，换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶，若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞；
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