一、NCM460细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | NCM460(人正常结肠上皮细胞) |
| 细胞别称 | NCM-460 |
| 细胞货号 | SNL-519 |
| 来源 | 结肠粘膜；上皮细胞；男性；68岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | LONZA |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | No, in immunosuppressed mice.No, in semisolid medium. |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | NCM460细胞来源于一名接受了部分胃切除术以切除分化不良的胃肿瘤的68岁西班牙裔男性，手术切除的边缘延伸到横结肠，这部分被组织病理学家指定为正常，并用作NCM460细胞原代培养的组织来源。NCM460细胞上皮标志物细胞角蛋白的阳性率超过90%，肠上皮标志性的绒毛和人分泌成分也呈阳性，但对内皮标志物如因子VIII和多种淋巴细胞标志物如CD4和CD23呈阴性，然而偶尔的细胞亚群波形蛋白呈阳性。由于细胞具有体外分化的多克隆能力，我们得出结论，NCM460细胞在群体中保持着干细胞成分，通过周期性酸希夫染色和免疫测定显示神经内分泌标志物铬粒蛋白的表达，粘蛋白阳性细胞的存在证实了这一点。NCM460细胞不在软琼脂中生长，在裸鼠中无致瘤性。 |
二、NCM460细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NCM460细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.建议10代内完成细胞实验；
我们推荐使用尚恩生物 人正常结肠上皮细胞专用培养基（产品货号：SNLM-519）作为NCM460(人正常结肠上皮细胞)的专用培养基。
