一、C666-1细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | C666-1(人鼻咽癌细胞) |
| 细胞别称 | c666-1；C6661 |
| 细胞货号 | SNL-516 |
| 来源 | 鼻咽癌；男性 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | 香港中文大学威尔斯亲王医院 |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | Yes, in nude mice. |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | C666-1细胞是其亲本细胞系C666的亚克隆，来源于中国南方的NPC异种移植。C666-1细胞粘附生长，缺乏接触抑制，细胞持续表达EBV编码的RNA，细胞角蛋白阳性。此外，C666-1细胞表达EBNA1蛋白、LMP1和LMP2转录物，因此类似于EBV潜伏期II模式。该病毒基因型为EBV-1，其潜伏膜蛋白1基因在羧基末端显示出30bp的缺失，这两个结果与中国南方鼻咽癌肿瘤的发现一致。细胞遗传学分析显示了C666-1细胞亚二倍体状态，染色体模式数为45。C666-1在鼻咽癌细胞系中是独特的，因为它携带EBV。C666-1细胞可能是一个很好的研究工具，因为在中国患者的大多数原发性鼻咽癌活检中观察到病毒潜伏模式和基因型，而C666-1细胞也是如此。C666-1细胞在无胸腺裸小鼠中是致瘤的。 |
二、C666-1细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、C666-1细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞有大量圆形细胞贴壁或漂浮，注意收集细胞，无法确定活性的可以取样通过台盼蓝染色鉴别；
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