一、AC16细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | AC16(人心肌细胞) |
| 细胞别称 | |
| 细胞货号 | SNL-483 |
| 来源 | 心肌；心室；杂交细胞 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞、上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 杂交细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | AC16细胞来源于来自成年人心室心脏组织的原代细胞与SV40转化的尿苷营养缺陷型人成纤维细胞的融合，不含线粒体DNA。融合后的细胞在无尿苷培养基中选择以去除未融合的成纤维细胞后，进一步亚克隆所得融合细胞，随后筛选SV40大T-ag、β-肌球蛋白重链（βMHC）和连接蛋白43（CX-43）。AC16细胞的增殖和分化可以通过改变培养条件和沉默SV40 T-Ag的表达来控制。AC16细胞可用于在正常发育期间和病理条件下在细胞、器官和分子水平上研究心脏基因表达和功能。 |
二、AC16细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、AC16细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.该细胞培养时可能有部分黑点，具体原因与处理方法参考操作说明2、3条； 2.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间；
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