一、TOLEDO细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | TOLEDO(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞) |
| 细胞别称 | Toledo |
| 细胞货号 | SNL-477 |
| 来源 | 弥漫大B细胞淋巴瘤；女性；成年 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | 1640+20% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | Toledo细胞于1990年由从一名最初患有弥漫性大细胞淋巴瘤（DLCL）的患者的外周血白细胞（PBL）建立，患者在高剂量化疗和骨髓移植后，随后在大脑中出现淋巴瘤。Toledo细胞的形态与Burkitt's淋巴瘤相似，但这些细胞缺乏Burkitt's淋巴瘤的典型染色体易位，核型确实表现出多重染色体畸变。Toledo细胞不表达表面或细胞质免疫球蛋白。Toledo细胞EBV阴性，可以用于3D细胞培养和免疫学研究。 |
二、TOLEDO细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底，轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、TOLEDO细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80 度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜，第二天转入液氮保存。 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞悬浮圆形生长，偶有小聚团，部分细胞附于瓶底； 2.圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞，如果无法判断，可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率； 3.细胞生长较缓慢，注意控制密度，低密度培养细胞可能不长甚至死亡；建议1:2传代；
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