一、VCaP细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | VCaP(人前列腺癌细胞) |
| 细胞别称 | VCAP；Vcap；VertebralCanceroftheProstate |
| 细胞货号 | SNL-468 |
| 来源 | 前列腺癌；男性；59岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | Yes, in nude and SCID mice. |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | VCaP细胞是于1997年从一位不受激素影响的59岁的白人男性前列腺癌患者脊椎转移灶中建立的。VCaP细胞先在小鼠中进行异种移植传代，随后进行体外培养，体内及体外VCaP细胞都对雄性激素敏感。最近研究发现，VCaP细胞产生小鼠异种逆转录病毒Bxv-1，该病毒很可能是细胞在小鼠异种移植过程中获得的。VCaP细胞是一种生长非常缓慢的细胞系，在解冻后和继代培养后可能需要长达48小时才能附着。细胞通常需要至少2周或更长的时间才能达到约50%的融合，并始终存在粘附细胞、漂浮簇和中度至重度碎片的密集混合物。与T75瓶相比，T-25瓶中的细胞可以更好地恢复。不要丢弃培养基更换和传代培养过程中可能存在的任何漂浮细胞，使用温和的离心操作收集起来，并将其接种回原瓶。VCaP细胞以紧密形成的小簇和一些单个细胞附着，当细胞附着并开始增殖和扩散时，它们将生长为扁平的上皮样细胞岛，紧密堆积。VCaP细胞表达CK18、P53抗原、前列腺特异性抗原（PSA）、前列腺酸性磷酸酶（PAP）、Rb蛋白。VCaP细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究。 |
二、VCaP细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、VCaP细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞生长缓慢，注意控制传代密度不要过低； 2.细胞通常需要至少2周或更长的时间才能达到约50%的融合，并始终存在粘附细胞、漂浮簇和中度至重度碎片的密集混合物 3.不要丢弃培养基更换和传代培养过程中可能存在的任何漂浮细胞，使用温和的离心操作收集起来，并将其接种回原瓶；
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