一、OP9细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | OP9(小鼠骨髓基质细胞) |
| 细胞别称 | OP-9 |
| 细胞货号 | SNL-409 |
| 来源 | 骨髓基质；(C57BL/6 x C3H) F2-op/op；胚胎 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | EMEM(MEM+NEAA)+20% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | OP9细胞源自新生的(C57BL/6 x C3H)F2 -op/op小鼠颅盖。因编码M-CSF的基因中的一个突变，OP9细胞不能生成有功能的巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)，M-CSF的存在对胚胎干细胞(ES)分化成非巨噬细胞的血细胞有抑制功能。OP9细胞可以用于与小鼠胚胎干细胞共培养以诱导胚胎干细胞分化成成红血球来源的、骨髓来源的和B细胞谱系的血细胞。与OP9细胞共培养不需要外源的生长因子或复杂的胚胎结构，这个系统有助于研究造血细胞发育和分化的分子机制。OP9细胞可以用于免疫学和干细胞研究。 |
二、OP9细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、OP9细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间； 2.细胞生长较快，注意及时换液及传代； 3.细胞避免密度过高，过高密度培养可能导致细胞老化严重；
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