一、NCI-H446 [H446]细胞基本属性 |
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细胞名称 | NCI-H446 [H446](人小细胞肺癌细胞) |
细胞别称 | H446;H-446;NCI-446;NCIH446 |
细胞货号 | SNL-393 |
来源 | 小细胞肺癌;胸腔积液转移;男性;61岁 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | Yes, in nude mice(The cells form transplantable tumors with non-typical SCLC histology.) |
培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | NCI-H446细胞于1982年由D.Carney、A.F.Gazdar及其同事从一名61岁白人男性小细胞肺癌患者的胸腔液中分离出来,原始肿瘤的形态不是SCLC的特征。NCI-H446细胞是SCLC的生化和形态学变体,表达神经元特异性烯醇化酶和肌酸激酶的脑同工酶。NCI-H446细胞检测到L-DOPA脱羧酶、蛙皮素、加压素、催产素或胃泌素释放肽的水平。与正常细胞相比,NCI-H446细胞C-myc DNA序列扩增约20倍,C-myc RNA增加15倍。NCI-H446细胞最初在补充有10nM氢化可的松、0.005mg/mL胰岛素、0.01mg/mL转铁蛋白、10nM 17-β-雌二醇和30nM亚硒酸钠的无血清RPMI 1640培养基中繁殖。NCI-H446细胞在裸鼠中形成具有非典型SCLC组织学的可移植肿瘤。 |
二、NCI-H446 [H446]细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NCI-H446 [H446]细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
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