一、MET-5A细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | MET-5A(人间皮细胞) |
| 细胞别称 | MeT5A；MeT5A；Met5A；MET5A；MesothelialcellstransfectedwithpRSV-T5A |
| 细胞货号 | SNL-364 |
| 来源 | 膜间皮细胞；SV40转化；男性；成年 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 转化细胞系 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | No, The cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice, but did form colonies in semisolid medium. |
| 培养条件 | M199+10% FBS+1%ITS+2% HEPES+0.4uM Hydrocortisone+3.3nM EGF+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | MET-5A细胞是用pRSV-T质粒（包含SV40早期区和Rous肉瘤病毒长末端重复序列的SV40 ori构建体）转染从非癌个体获得的胸膜液中分离间皮细胞并克隆的。MET-5A细胞波形蛋白、角蛋白和SV40T抗原染色阳性。MET-5A细胞可用于筛选具有生长因子、致癌物、诱变剂等活性的化学和生物制剂。 |
二、MET-5A细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、MET-5A细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.该细胞培养时黑点较多，具体原因与处理方法参考操作说明2、3条； 2.细胞贴壁较弱，消化时间较短，注意控制消化时间； 3.该细胞需要添加细胞因子才能正常生长，建议使用我司专用培养体系，货号：SNLM-364；
我们推荐使用尚恩生物 人间皮细胞专用培养基（产品货号：SNLM-364）作为MET-5A(人间皮细胞)的专用培养基。
