一、L Wnt-3A细胞基本属性 |
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细胞名称 | L Wnt-3A(小鼠皮下结缔组织细胞) |
细胞别称 | L-Wnt-3A; L-Wnt3A; LWnt3A; LWnt-3A |
细胞货号 | SNL-347 |
来源 | 100日龄;雄性;C3H/An;100日龄 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
细胞类型 | 转化细胞系 |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | DMEM+10% FBS+0.4mg/mL G418+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | L Wnt-3A细胞是由L-M(TK-)细胞用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选出的稳转株。Wnt-3A基因编码一个有多种信号功效的分泌性糖蛋白,Wnt基因控制胚胎发育过程中的许多行为和生长情况。L Wnt-3A细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白,L Wnt-3A细胞是目前生产Wnt-3A条件培养基的最好来源。由于Wnt-3A条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子,对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其亲本细胞株作对照。L Wnt-3A细胞可以用于3D细胞培养。 |
二、L Wnt-3A细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、L Wnt-3A细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞贴壁较弱,消化时间偏短,注意控制消化时间; 2.注意控制细胞密度,过高或者过低都可能影响细胞状态,不要长时间高密度培养; 3.细胞密度过高时及时传代,避免培养基变黄导致细胞脱落或者状态变差; 4.细胞生长较快,注意及时换液及传代; 5.细胞传代容易成团聚集,注意尽量吹散细胞; 6.细胞是转染永生化的,需要添加G418筛选培养,未添加筛选抗生素的细胞可能会失去永生特性,无法增殖;
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