一、GH3细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | GH3(大鼠垂体瘤细胞) |
| 细胞别称 | GH 3 |
| 细胞货号 | SNL-305 |
| 来源 | 垂体瘤；雌性；Wistar Furth；7月龄 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 半贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | F12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | GH3细胞是由Tashjian·A·H等人于1965年7月从一只7月龄的雌性Wistar-Furth大鼠的垂体肿瘤中分离建立的。GH3细胞不是直接来源于GH1细胞的克隆，而是从原代培养的GH1细胞在大鼠身上传代两次形成的肿瘤中建立的。上皮细胞样的GH3细胞比GH1细胞分泌更高水平的生长激素，也可产生催乳素。对调控GH3细胞分泌蛋白类激素的研究表明，氢化可的松可以刺激GH3细胞生长激素的分泌、抑制催乳素的产生。GH3细胞使用Eagle的最低必需培养基（旋转培养）补充15%马血清和2.5S时可以适应悬浮培养中的生长，此时细胞持续产生生长激素和催乳素。GH3细胞可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。 |
二、GH3细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.轻轻吸走培养上清，留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞； 2.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 4.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、GH3细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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