一、RLE-6TN细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | RLE-6TN(大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞) |
| 细胞别称 | RatLungEpithelial-6-T-antigenNegative |
| 细胞货号 | SNL-277 |
| 来源 | 肺；上皮细胞； SV40 pRSV-T转化；雄性；56日龄 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 转化细胞系 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | No, not tumorigenic in nude mice |
| 培养条件 | F12K+10% FBS+10ug/mL Insulin+5ug/mL Transferrin+5ng/mL Selenium+5ng/mL EGF+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | RLE-6TN细胞是56日龄的雄性F344大鼠使用链酶蛋白酶溶液气道灌注后分离的。RLE-6TN细胞传代到第五代时经过脂质体转染了SV40 (pRSV-T DNA)，后来细胞通过核免疫染色和PCR检测，SV40-T抗原的表达为阴性，表明这些细胞是通过自发永生化获得的。RLE-6TN细胞表现出肺泡II型细胞的特征，例如含脂质包涵体（磷化氢3R染色和电子显微镜）和细胞角蛋白8和19的表达；细胞不表达碱性磷酸酶活性。据报道，RLE-6TN细胞的几种趋化细胞因子的表达与肺泡II型细胞的原代培养物相似。尽管RLE-6TN细胞SV40抗原呈阴性，但应至少在生物安全2级控制下作为潜在生物危险材料处理。 |
二、RLE-6TN细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、RLE-6TN细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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