一、AML-12细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | AML-12(小鼠正常肝细胞) |
| 细胞别称 | AML-12; AML12; AlphaMouseLiver12 |
| 细胞货号 | SNL-242 |
| 来源 | 肝；自发永生；CD-1 line MT42 transgenic；3月龄 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | No, the cells do not form colonies or grow in soft agar.No, the cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice |
| 培养条件 | DMEM/F12+10% FBS+10ug/mL Insulin+5.5ug/mL Transferrin+5ng/mL Selenium+50ng/mL Dexamethasone+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | AML12（alpha mouse liver 12）细胞是从3个月大的转染人TGF-α基因的小鼠（CD1-MT42品系）小鼠的正常肝脏中分离的肝细胞。通过电子显微镜观察发现，AML12细胞表现出典型的肝细胞特征，如过氧化物酶体和胆管样结构。AML12细胞保持表达血清蛋白（白蛋白、α1抗胰蛋白酶和转铁蛋白）和缝隙连接蛋白（连接蛋白26和32）高水平mRNA的能力，并且仅含有乳酸脱氢酶同工酶5。AML12细胞表达高水平的人TGF-α和低水平的小鼠TGF-α。AML12细胞肝脏特异性蛋白的表达随着培养时间的推移而降低，但可以通过在无血清培养基中培养细胞而重新激活。AML12细胞可以用于3D细胞培养、高通量筛选、毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。 |
二、AML-12细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、AML-12细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条； 2.细胞生长偏慢，注意控制传代密度不要过低；
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