一、MCF 10A细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | MCF 10A(人正常乳腺上皮细胞) |
| 细胞别称 | MCF10A；MCF.10A；MCF10A；MCF10a；MCF-10Attached；MichiganCancerFoundation-10A |
| 细胞货号 | SNL-225 |
| 来源 | 乳腺；上皮细胞；自发永生；女性；36岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | No, in immunosuppressed mice；Yes, in semisolid medium |
| 培养条件 | DMEM+5% FBS+20ng/mL EGF+0.5μg/mL Hydrocortisone+10μg/mL Insulin+1% NEAA+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | MCF 10A细胞于1984年从患有纤维囊性乳房的36岁白人女性的乳腺中分离出来，来源于群体中的粘附细胞，是一种非致瘤性上皮细胞系。MCF 10A细胞通过电子显微镜观察，显示出管腔导管细胞的特征，而不是肌上皮细胞的特征，同时培养基中的钙含量对细胞的形态有很大影响。MCF 10A细胞上皮唾液粘液、细胞角蛋白和乳脂球抗原呈阳性，还表达通过与MFA乳腺和MC-5单克隆抗体的阳性反应检测到的乳腺特异性抗原。MCF 10A细胞在胶原蛋白中表现出三维生长，并在融合培养物中形成圆顶。到目前为止，细胞还没有表现出终末分化或衰老的迹象。MCF 10A细胞对胰岛素、糖皮质激素、霍乱肠毒素和表皮生长因子（EGF）有反应。MCF 10A细胞可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。 |
二、MCF 10A细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、MCF 10A细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞贴壁偏紧，消化时间偏长，注意控制消化时间； 2.该细胞需要添加细胞因子才能正常培养，建议使用我司专用完全培养基，货号：SNLM-225；
我们推荐使用尚恩生物 人正常乳腺上皮细胞专用培养基（产品货号：SNLM-225）作为MCF 10A(人正常乳腺上皮细胞)的专用培养基。
