一、KG-1a细胞基本属性 |
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细胞名称 | KG-1a(人急性骨髓白血病细胞) |
细胞别称 | KG-1A;KG1A;KG1a |
细胞货号 | SNL-159 |
来源 | 急性髓系白血病;男性;59岁 |
细胞形态 | 圆形 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
生长特性 | 悬浮细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | KG-1a细胞是一种早幼粒细胞巨噬细胞系,从一名59岁白人男性急性髓细胞白血病患者的骨髓中分离出来。第十代传代后,亲代KG-1细胞在相同条件下在同一部门的两个单独实验室中培养。35代后,一个实验室中的细胞表现出与亲本系的形态差异。两个种群都表现出许多共同特征,它们具有相似的倍增时间,EBNA和VCA均为阴性,不表达表面免疫球蛋白,并表现出相同的HLA和同工酶谱。与亲代KG-1相比,KG-1a亚系由未分化的早幼粒细胞组成,KG-1a群体对软琼脂培养中的集落刺激因子无反应,并且不表达Ia样抗原。KG-1a细胞不对ASD氯乙酸酯酶、α-萘丁酸酯酶或过氧化物酶染色。KG-1a细胞对佛波醇二酯诱导的巨噬细胞分化有抗性,细胞增殖不受佛波醇双酯的影响。KG-1a细胞在形态、细胞化学和功能上都不如亲代KG-1成熟。尽管来源于KG-1,并且几乎与KG-1相同,但KG-1a细胞不会自发分化为粒细胞和巨噬细胞样细胞,不表达DR,也不会对集落刺激因子(CSF)产生反应。该细胞系由DW Golde保藏,可用于3D细胞培养、免疫系统疾病研究,也是一种合适的转染宿主。 |
二、KG-1a细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清; 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 3.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底,轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、KG-1a细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80 度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜,第二天转入液氮保存。 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞悬浮圆形生长,偶有小聚团,部分细胞会附着瓶底; 2.圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞,如果无法判断,可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率; 3.悬浮细胞密度维持1E5-5E5/mL之间,密度过低或者过高可能会影响细胞状态;
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