一、RAW 264.7细胞基本属性 |
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细胞名称 | RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) |
细胞别称 | RAW264;RAW2647;RAW264.7;RAW-264.7;Raw264.7;Raw264.7 |
细胞货号 | SNL-112 |
来源 | 单核巨噬细胞白血病;雄性;BALB/c;成年 |
细胞形态 | 不规则形 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
生长特性 | 半贴壁细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 2 |
致瘤性 | |
培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | RAW 264.7细胞是从Abelson小鼠白血病病毒(MuLV)诱导的肿瘤中建立的雄性小鼠巨噬细胞细胞系,Raschke等人于1976年首次报道了该细胞系。RAW 264.7细胞sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。RAW 264.7细胞不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。根据Janet W.Hartley博士在2008年发表的一项研究,RAW 264.7细胞被证明表达生态性和多向性MuLV,并且使用XC噬斑试验对病毒复制呈阳性。RAW 264.7细胞可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导RAW 264.7细胞分解红血球,但对肿瘤靶细胞无作用。RAW 264.7细胞易于繁殖,DNA转染效率高,对RNA干扰敏感,并支持小鼠诺如病毒的复制,可以用于3D细胞培养、免疫系统紊乱和免疫学研究,也是一种合适的转染宿主。 |
二、RAW 264.7细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.轻轻吸走培养上清,留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞; 2.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清; 3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 4.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 半贴壁细胞会附着瓶底,但贴壁不紧,轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响。 |
三、RAW 264.7细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞半贴壁圆形或多角形生长,部分悬浮圆形,传代时均可收集培养,换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶,若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞; 2.该细胞对胰酶比较敏感,胰酶消化后细胞形态会更多梭形,贴壁变紧,传代不建议使用胰酶消化该细胞; 3.该细胞生长较快,培养基消耗较快,培养时注意密切关注细胞状态,密度较高、培养基有变黄趋势时及时换液避免细胞状态变差;
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