一、HT-29细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | HT-29(人结肠癌细胞) |
| 细胞别称 | HT29；HT29 |
| 细胞货号 | SNL-069 |
| 来源 | 结肠腺癌；女性；44岁 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样(卵圆形成片生长) |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | Yes, in nude mice; forms well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade I); tumors also form in steroid treated hamsters. |
| 培养条件 | McCoy's 5a+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | HT-29细胞是由J·Fogh在1964年用移植培养方法从一名44岁白人女性结肠直肠癌患者的原发肿瘤中分离出来，在和含15S的F12培养液中培养。近来，已建株的HT-29细胞用含10%血清McCoy's5A培液培养。HT-29细胞在裸鼠中致瘤，也能在类固醇处理的地鼠中致瘤。HT-29细胞合成IgA、CEA、TGFβ结合蛋白和黏液素等；表达尿激酶受体，但没有检测到血浆酶原活性；不表达CD4，但细胞表面表达半乳糖神经酰胺（HIV的可能替代受体）。HT-29细胞的超微结构特征包括微绒毛、微丝、带有深色颗粒的大空泡线粒体、带有游离核糖体的光滑粗面内质网、脂滴、少量初级溶酶体和许多次级溶酶体。细胞表达尿激酶受体，但不具有可检测的纤溶酶原激活活性。HT-29细胞CD4呈阴性，但细胞表面存在半乳糖神经酰胺（一种可能的HIV替代受体）的表达。HT-29细胞c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis和fos癌基因表达阳性，但未检测到N-myc癌基因表达，p53抗原过度产生，p53基因的密码子273存在G->a突变，导致Arg->His取代。HT-29细胞可以用于3D细胞培养、高通量筛选、癌症研究和毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。 |
二、HT-29细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、HT-29细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条；
我们推荐使用尚恩生物 人结肠癌细胞专用培养基（产品货号：SNLM-069）作为HT-29(人结肠癌细胞)的专用培养基。
