| 产品名称 | Annexin V-EGFP/PI 染色凋亡试剂盒 |
| 货号 | SNK-001 |
| 规格 | 20 次/50 次 |
| 简介 | 磷脂酰丝氨酸（PS）在正常细胞中存在于细胞膜内侧，而在凋亡早期，PS由细胞膜内侧外翻至细胞膜外侧。AnnexinV是一种钙依赖性磷脂酰丝氨酸结合蛋白，对磷脂酰丝氨酸PS具有高亲和力，AnnexinV经过与EGFP荧光染料标记，可以与暴露在细胞外的PS与早期凋亡细胞的细胞膜结合。细胞凋亡可通过流式细胞术或荧光显微镜检测。 PI（碘化丙啶）可与双链DNA特异性结合，产生强烈的荧光，通常无法穿透细胞膜，由于晚期凋亡或坏死的细胞膜完整性丧失，PI可进入细胞染色DNA，与AnnexinV联合使用，可区分处于不同凋亡阶段的细胞。 |
| 使用方法 | A.抗体与细胞孵育 1.按照实验方案诱导细胞凋亡。300g离心5分钟，丢弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。 2.离心收集1-5×10^5个细胞，丢弃上清。PBS洗涤细胞1次，离心后弃上清。 3.每个样品加500µL的1XBindingBuffer重悬细胞。 4.加入5µLAnnexinV-EGFP染色液和5µLPI染色液。 5.轻轻涡旋混匀，室温避光孵育15分钟。 6.立即检测，如果不能及时检测，请放冰上避光静置并在1小时内完成检测。 B.流式细胞检测 流式细胞术分析AnnexinV-EGFP结合(Ex=488nm；Em=530nm)，采用EGFP信号检测器(通常为FL1)，采用藻红蛋白发射信号检测器(通常为FL2)进行PI检测。 对于贴壁细胞，首先收集细胞培养液，PBS洗涤细胞一次后用胰酶消化细胞，然后加入收集的细胞培养液，把细胞轻轻吹下来，离心弃上清，细胞用PBS重悬并计数，之后进行步骤A.2-5。 C.荧光显微镜检测 将步骤A.5中的细胞悬液涂布在载玻片上。用盖玻片盖住细胞。 如果分析贴壁细胞，直接在细胞爬片上培养细胞。孵育后(A.5)，将细胞爬片倒置在玻片上，观察细胞。 |
| 产品组分 |  |
| 存储条件 | 避光保存，禁止冷冻保存，2-8°C 保存。 |
| 保质期 | 一年 |
注意事项：
1.必须使用活细胞进行检测，不能使用破坏细胞膜完整性的试剂处理细胞。
2.普遍认为PI有潜在致癌风险，操作时注意戴手套操作，避免交叉污染。
3.孵育结束后，应尽量在1h以内检测结果，否则结果可能出现异常。
4.细胞经过消化、离心、清洗后可能会出现凋亡增多的情况，因此必须注意操作尽量轻柔，离心转速和时间尽量低，尤其是贴壁细胞不要消化时间过长导致细胞提前进入凋亡。
5.AnnexinⅤ是Ca2+依赖性的磷脂结合蛋白，因此消化细胞时尽量不要使用含EDTA的消化液，PBS也不要含EDTA等螯合剂。
6.检测贴壁细胞时，应将诱导凋亡后漂浮在培养液中的死细胞或悬浮细胞收集，与收集的贴壁细胞合并一起检测。否则容易丢失凋亡细胞，导致凋亡阳性率低于实际。
7.荧光物质容易猝灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和储存过程中也要尽量注意保光。
8.操作时戴好手套，避免外源污染。
9.该产品仅供科研使用，不得用于诊断或临床实验。
