在体外细胞实验中，稳定且足量的细胞资源是各类研究的重要基础。然而，正常组织来源的原代细胞虽然在生理特性上最接近体内真实状态，但其增殖能力却受限于“海夫利克极限”（Hayflick limit），在经历有限次数的传代后便会走向衰老和死亡，这为长期、可重复的科学研究带来了挑战。细胞永生化技术，正是通过人为干预，使细胞突破这一天然“寿命枷锁”，从而获得持续增殖能力的关键手段。无论是利用病毒载体导入外源基因，还是通过激活端粒酶，其核心目标都是为了建立一种性状稳定、能够无限传代的细胞模型，以满足基础科研、药筛等领域对高质量细胞资源的迫切需求。本文将就细胞永生化相关的常见疑问进行梳理与解答。
1.原代细胞的特点有哪些？
原代细胞具有细胞原始特性，细胞来源特性（从组织或器官中直接分离得到的细胞，组织样本个体差，分离技术难度大），细胞特点（生长和增殖能力有限，培养条件苛刻等）这些特点。
2.细胞永生化的方法有哪些？
细胞永生化的方法有自发突变介导、化学物理介导、原癌基因激活/抑癌基因干扰失活介导、病毒介导、端粒酶激活介导五种方法。
3.原代细胞永生化的实验流程有哪些？
原代细胞永生化实验流程有：原代细胞分离提取—细胞鉴定—细胞转染—细胞筛选与验证—细胞扩增。
4.细胞永生化后形态会发生改变吗？
这个是可能的，尤其是一些免疫细胞，例如胶质细胞，巨噬细胞等，经过病毒介导永生化后，细胞可能会有刺激炎症反应，形态可能会改变。
5.细胞永生化后能换成普通的培养基培养吗？
不建议，如果是经费确实紧张，在细胞冻存有保种的情况下，拿部分细胞测试能否用普通的培养基培养。
6.永生化用的病毒或者质粒从哪里来？
可以自己构建，也可以直接从公司购买，提出自己的需求，找一下病毒公司购买也是很方便的。
7.端粒酶逆转录酶方法是什么？
端粒酶逆转录酶cDNA（human telomerase reverse transcriptase,hTERT），可以激活端粒酶活性，阻止染色体端粒降解。它以自身的RNA组分为模板，将互补的DNA核苷酸一个一个地加到染色体末端，从而逆转录并延长端粒DNA。达到细胞永生化。
8.在细胞培养的时候有黑色团状物质是不是污染？
细胞培养过程中出现黑色团状物质，有可能是以下3种情况，第一种是细胞培养液中的血清析出物，这种情况下，黑色团状物漂浮在培养液中，数量不多，高倍镜下团状物边缘没有丝状物。第二种情况是死细胞团，接种时间长后可能会贴壁粘附在培养皿或者瓶底。经过消化后低速离心可以改善。第三种情况是污染，主要是真菌污染或者霉菌污染。团状物在高倍镜下看到有细丝或者放射状，就是真菌污染，如果是小的圆形葡萄样分散，属于霉菌污染。总的来说，不好判断是否污染，最直接的方法是做菌检，或者取培养液做空培养，看这种黑色团状物是否有增多。
细胞永生化技术通过赋予原代细胞无限增殖的能力，为生命科学研究提供了强大而便利的工具。这些永生化细胞模型不仅性状稳定均一，易于培养，节省了反复分离原代细胞的成本和时间，更在疾病机制研究、药物开发与毒性评估、生物制品生产等诸多领域展现出不可替代的价值。在利用这项技术时，严谨的验证和持续的质量控制至关重要。希望本篇答疑能为您的相关研究提供清晰的思路与有效的帮助。