一、细胞表面染色操作流程
1.细胞计数：将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数；若为贴壁细胞，需要先用胰酶消化细胞，300g离心5min，去上清。
2.制备单细胞悬液：将收集的细胞用1mL预冷0.5%BSA/PBS溶液重悬，300g离心5min，去上清，重复2次；用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x10^7个细胞/mL，取100μL细胞悬液置于流式管内。
3.（可选）阻断Fc受体：可用抗体同源血清全IgG抗体与细胞充分混匀，室温孵育10-20min。
4.一抗孵育：每管加入稀释后的一抗溶液100μL，2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管，使细胞和抗体充分反应。若为直标抗体，需要避光反应，跳到步骤7。抗体稀释液为0.5%BSA/PBS溶液。
5.洗涤：300g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
6.二抗孵育：对于非荧光染料直标抗体，加入100μL荧光二抗重悬，避光2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管。
7.洗涤：300g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
8.用200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞，4℃保存，上机分析。
二、细胞胞内染色操作流程
1．细胞计数：将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数；若为贴壁细胞，需要先用胰酶消化细胞，300g离心5min，去上清。
2．制备单细胞悬液：将收集的细胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，300g离心5min，去上清，重复2次；用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x10^7个细胞/mL，取100μL细胞悬液置于流式管内，300g离心5min去上清。
3．固定：每管加入100μL细胞固定剂重悬细胞，2-8°孵育20min。固定剂可用4%多聚甲醛。
4．洗涤：600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
5．通透：每管加入100μL细胞通透剂重悬细胞，室温孵育20min。通透剂可用0.5%BSA/PBS（0.3%TritonX-100）
6.洗涤：600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
7.(可选）阻断Fc受体：用抗体同源血清全IgG抗体与细胞充分混匀，室温10-20min。
8.一抗孵育：每管加入稀释后的一抗溶液100μL，2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管，使细胞和抗体充分反应。若为直标抗体，需要避光反应，跳到步骤11。抗体稀释液为0.5%BSA/PBS溶液。
9.洗涤：600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
10.二抗孵育：对于非荧光染料直标抗体，加入100μL荧光二抗重悬，避光2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管。对于直标抗体直接跳到步骤11。
11.洗涤：600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
12.用200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞，4℃保存，上机分析。
注：实验建议设置空白对照，同型对照，空白对照不加一抗，同型对照将一抗替换为同型抗体。